- 组织来源： 上海中科院细胞库
- 器官来源： 人正常肝组织
- 生长状态： 贴壁生长
- 品系： hela污染细胞系
- 用途范围： 科研实验，不得用于临床
- 保存条件： -60°C
- 纯度： 80%-90
- 物种来源： 上海中科院细胞库
- 产地： 上海
- 品牌： 科翰盛
- 规格： T25瓶
- 细胞形态： 上皮细胞样
- 货号： 7702
细胞描述:
L-02 细胞建系鉴定于 1980 年(叶秀珍等, 1980) 。该细胞是一株正常肝细胞系,具有典型的肝细胞形态学特征,可用于多种实验研究。L-02样品细胞跟 EXPASY 细胞 数据库收录的细胞信息是*匹配的,不过这个细胞可能不被国外一些杂志认可 。 Problematic cell line: Contaminated. Shown to be a HeLa derivative (PubMed= ). Originally thought to originate from a normal fetal liver.
细胞特性
1) 来源:人正常肝组织
2) 形态 : 上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量: >1x10 6 细胞数
4) 规格: T25 瓶 或者 1mL 冻存管包装
5) 用途: 仅供科研使用。
运输和保存:干冰运输及复苏好存活细胞:( 1 ) 1mL 冻存管包装干冰运输,收到后 -80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏, 若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。( 2 ) T25 瓶复苏的存活 细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后 的处理:
1 )收到细胞后, 75% 酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37 ℃培养箱放置约 2-3h ,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2 )请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照( 10 ×, 20 ×)各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3 ) 贴壁细胞:细胞在 37 ℃培养箱中放置 2-3h ,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60% 以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中) , 加入新配制的*培养基 6-8mL ,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80% 以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4 ) 备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 收到细胞后 次传代建议 T25 培养瓶 1 : 2 传代 。
一. 培养基 及 培养 冻存 条件准备:
1) 准备 1640 培养基; 胎牛血清, 20%;双抗, 1% 。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳, 5% 。 温度: 37 摄氏度,培养箱湿度为 70%-80%。
3) 冻存液: 90%血清, 10%DMSO,现用现配。
二.细胞 处理 :
1) 冻存细胞的复苏::
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37 ℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含 4-6mL *培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min ,弃去上清液,*培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml *培养基的培养瓶(或皿)中 37 ℃培养过夜。 天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞 密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2次。
2. 加入0.25 %( w / v ) -0.53 mM EDTA 于 培养瓶中(T25瓶 1-2mL ,T75瓶 2-3mL ) , 置于 37 ℃ 培养箱中消化1-2 分钟 (难消化的细胞可以适当延长消化时间) ,然 后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后 加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来 终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM 条 件下离心 3-5min ,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。 将细胞悬液按 1 : 2 的比例分到新 T25 瓶中,添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。
3 )细胞冻存 : 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25 瓶为例;
1. 细胞 冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106 ~1 × 10 7 个活细胞 /m l.
2. 1000rpm 离心 3-5min ,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每 1ml 冻存液含1×106 ~1 × 10 7 个活细胞 /ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中, -80 度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
