倍性育种 ,指通过改变染色体的数量,产生不同的变异个体,进而选择性状优良变异个体培育新品种。正常的配子细胞中所包含的染色体数或半数的体细胞染色体数称为一套单倍染色体,用符号N表示。具有一个染色体组的细胞和由这样的细胞组成的个体称为单倍体(N) ,具有两个染色体组的细胞或个体称为二倍体(2N),具有两个以上整套染色体组的细胞或个体则称为多倍体,包括三倍体(3N)、四倍体(4N)等。
传统的倍性鉴定主要采用常规压片法镜检统计染色体数目,但采用这种方法很难寻找到分裂中期染色体分散良好并可进行计数的细胞,尤其是对于染色体条数众多的物种,而且整个过程耗时长,检测效率低。采用 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) 进行倍性分析大大提高了倍性分析的效率,几分钟就可以快速准确检测同一物种范围内不同倍性的样品。FCM作为一项快速、高效的检测技术,被广泛应用于细胞分类学、植物遗传学及植物生理学等研究领域中。
实验原理
首先通过物理方法使动植物组织(植物一般是叶片,动物一般是血液或者肌肉组织)中的细胞游离出来,再加入裂解液将细胞中的细胞核释放出来,并打开DNA链,然后用DAPI染液将细胞核DNA上的A-T碱基对特异性染色,再用仪器检测被染色的A-T碱基对发出的荧光强度,这个荧光强度对应的就是一个细胞中DNA的含量。比如二倍体的荧光强度是50(横坐标),那么四倍体的荧光强度就是100(横坐标)。纵坐标是细胞数量的显示。
实验方法与检测设备
我们 采用配置紫外激光光源的Sysmex-Partec CyFlow倍性分析仪,搭配Sysmex CyStain DAPI倍性分析试剂盒(两步法)和CellTrics滤网,在2min内即可完成一个样本的检测,为您提供高效、准确的检测结果,并出具专业报告。实验步骤如下:
1)在裂解液中物理破碎动植物组织,动物组织一般是用剪刀剪碎,植物一般是叶片用锋利的双面刀片切碎。不同的组织样本处理的方法各不相同;
2)将带有裂解液的破碎的组织样本过细胞滤网(常用的为sysmex公司的30umCellTrics滤网)过滤以去除未切碎的组织块;
3)加入4倍裂解液体积的染液,用手指轻弹混匀后上机检测;
4)收集结果。
成功检测案例
目前我们应用这种方法成功检测倍性的植物有:草莓,兰花,番茄,水稻,拟南芥,小麦,玉米,牡丹,芍药,猕猴桃,马铃薯,谷子,紫薇,百合,月季,柑橘,枇杷等;动物有各种鱼类,海参幼虫,贝类等。
如果您有实验服务需要,请联系我们,我们将竭诚为您提供真实可靠的实验技术服务。
:李经理,,deshidabj