酶联免疫法是什么？

    酶联免疫法吸附是一个重要的，高通量取代了低级通量的补体结合，在20世纪80年代作为主要检测血凝抑制免疫测定。在ELISA中，组织样品（如尿，特别是血清）检测，以检测抗体的存在。抗体的存在表明该范例的源已暴露在抗原，即，一经曝光，通常是收集的蛋白诱导的免疫应答的物质。抗体作为抗原的指纹，间接的诊断医师指示其在宿主中的存在。因此，在ELISA免疫测定法是一种间接的。几种其他间接免疫测定法也是常用的，特别是间接荧光抗体试验，或IFA 。

    酶联免疫法通常通过结合抗原的ELISA在固体表面上，然后加入组织样品，二次抗体，记者标签，洗涤步骤之间。在组织中的抗体将结合到抗原和抗体（或其他抗原，如果它是一个夹心法） 。二次抗体结合的标签，荧光。洗涤后，将*的荧光抗体，因为它们将锚定的抗原，这势必会在固体表面，也被称为固相的第二抗体和标签。虽然ELISA可用于演示的药代动力学或荷尔蒙的影响，它的主要用途是在诊断，在这种能力，它检测传染性病原体，包括病毒，细菌，真菌，原生动物和寄生虫所表达的抗原的抗体。zui常见的用途是在人类的ELISA检测血清样品中的HIV-1 。的ELISA方法也可用于许多不同的动物物种。这种书面记录，我将集中讨论的ELISA血清中检测传染性病原体的能力。

过程

     在开始测试之前....几件事情必须完成。首先，抗原必须传播。通常有两种类型的抗原：常规和重组。传统的抗原制备接种传染性病原体种子的传染性病原体样本已检测质量控制和可能准备其次，就是一台主机或一个组织的文化。接种主机或培养物和靶组织或收获后提取孵化。重组抗原的制备是通过首先回顾传染性病原体的基因组隔离感兴趣的基因（ GOI ）编码抗原。所述GOI然后拼接到载体中，并接种到宿主中或培养。重组抗原有几个优点，即额外的纯度和传染性病原体的工作的人的安全。一种无害的载体，包含了埃博拉病毒抗原，然后一起工作现场埃博拉病毒，毕竟这是比较容易的工作。收获后，抗原纯化不同的治疗方法，去除细胞碎片或其他外来物质，并测定效价和纯度。

其次，如果要使用阳性和阴性对照血清，他们必须做好准备，前者通过与传染性病原体和感染宿主提取免疫血清;后者使用非免疫血清。正面和字段的字段阴性血清，是已知的血清样品，以从历史数据是正或负，也可以使用。

     zui后，被涂覆到所述固相上的抗原必须。通常情况下，使用96孔微量滴定板。抗原上涂布板。此外，组织控制，可涂。用于传播抗原主机或组织培养的那种组织控制是一个未感染的样本。重组抗原，这可能仅仅是一种载体，其中印尼政府拼接。

测试

     从仓库中提取的抗原和组织控制涂层钢板。对照血清，血清样本，包括预先稀释到板分配。然后将所述板孵育一定量的时间，并洗涤。

*次温育和洗涤后，第二抗体被分配到板，板温育，并再次洗涤。二次抗体，也称为共轭，也可能包括辣根过氧化物酶conjuagted的抗免疫球蛋白（Ig ） ，并结合物种的血清。

第二次温育和洗涤后，标签被分配到板，板温育，并再次洗涤。有不同类型的标签：一些荧光，其它的是放射性的。

第三孵化和洗涤之后，该板块被读取，这可能是手工完成，主观量化，或通过一个阅读器，这将产生客观的定量结果。对数据进行标准化。通常情况下，血清中含有不同的逆转录病毒，可能会在一些小的方式是否是存在于血清样品中的抗体与抗原反应。被称为荧光由于这个背景，或简单的“噪声” ，而不是“信号” ，抗原得分。解决此问题通常是减去抗原得分的组织控制分数线。控制数据或历史数据的基础上，然后，将样品符合任一免疫（正）或传染性病原体的非免疫（负） 。

讨论

     在ELISA中所概述的免疫测定法的书面记录的相当大的优势，即：高通量处理，特异度，数据的可靠性。这些特异性也是很大的弱点：每口井只能有一种类型的抗原或组织控制。在大型试验设施，通常涂板交替行一个antigne ，其组织控制。十分不利的是，用于执行对一组病毒的血清，需要一种类型的板，每种抗原。因此，对三种抗原检查一个样本需要三大板块，它可以是一个巨大的时间和金钱的浪费。zui后，虽然在测试本身是便宜的，抗原，组织控制，血清，和其他试剂的生产，如果在内部完成，是相当可观的。下一代的免疫测定法将未来的悬浮微阵列测试，这将允许一个以上的不同的抗原或组织控制在一个良好。