平时在ELISA试剂盒实验室zui常听到的一句话就是“今天某某试验没做好是为什么？今天某某试验没出结果是什么原因？今天某某试验为什么会是这样的呢？" 等等。然后仔细一查找原因，往往是由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到。以下是集各路朋友的一些经验，与大家分享：
1跑page胶的时候，小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。
2. 提取质粒的时候，zui后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间，是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实*没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说，节约了大量的时间。
4. 有关缓冲液和培养基配置
1）将缓冲液配方中的成分分别以10－100倍配成母液储存，需要的时候只需将相应的母液混合，补加水稀释即可
2）配培养基时通常会忘记各成分的量，如配LB时的三个成分不记得到底哪个是5g，哪个要10个，因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量，如配LB时，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前临时翻书
5. 有关PCR主反应液配置:

在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定，每次配置PCR反应液很繁琐，可以将其配置类似kit的形式，按你需要的反应体系列表，然后放大100倍配置100×主反应液（100次反应），其中含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分装或一管储存在－20度，在需要的时候拿出融开，然后按所需的PCR反应个数吸取相应的倍数，再补加相应反应倍数的Taq和引物，混匀后分装，这样做的好处如下：
1）可极大的节省宝贵的时间，可早点收工，看球
2）避免每次反应加样不均的可能
3）大大减少PCR假阳性的产生
6. 有关酶切反应液的配置:
在做酶切时，也可以象PCR一样配置主反应液，每次反应前先列好反应的体系，算好需要的反应数，然后按所需反应的体系按所需反应数放大，加入buffer、酶、水，质粒栏空缺，然后混合后按除质粒DNA的体积分装，然后再在每管中加入相应体积的质粒DNA酶切，这样做的好处如下，特别是当同时有10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显：
1）各反应成分均一
2）可大大减少限制型内切酶的使用
3）节省时间

ELISA试剂盒技术的特点
可扩增RNA或cDNA
先按通常方法用寡脱氧核苷酸引物和反转录酶将mRNA转录成主链cDNA，再将得到的单链cDNA进行PCR扩增。即使mRNA转录片段只有cDNA中的0．01％，也能经PCR扩增出10倍242bp对长度的特异性片段。有些外显子分散在一段很长的DNA中，难于将整段DNA大分子扩增和做序列分析。若以mRNA作为模板，则可将外显子集中，用PCRl次便完成对外显子的扩增并进行序列分析。

特异性强
自从提取出耐热TaqDNA聚合酶以来，在热变性处理时不被消化、不必在每次循环扩增中再加入新酶，以及在较高温度下连续反应，显著提高了PCR反应产物的特异性。PCR扩增的特异性还依赖于两个引物设计的好坏，依赖于引物与模板结合的正确性。PCR反应时退火温度对特异性也有影响，一般来说，退火温度越高，扩增的特异性越好。高温启动法也可增加PCR扩增的特异性，即通过在高温（70℃）下加入某些必需因子（DNA聚合酶、模板DNA、Mg2+或引物等），使TaqDNA聚合酶仅在反应达到较高温度（>70℃）时才发挥作用。其他因素如酶浓度、dNTP、Mg2+、pH值等对PCR的特异性也有一定的影响。

敏感性高
如前所述，PCR产物的生成以指数方式增加，能将极微量的靶DNA成百万倍以上地扩增到足够检测分析量的DNA。这是PCR技术zui主要的特点，它可对单拷贝基因、单个细胞、单根头发、一滴血等微量标本进行分析。

有一定程度单核苷酸错误掺入
TaqDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性，因而不能纠正反应中发生的核苷酸错误掺人；与大肠杆菌聚合酶I Klenow片段相比较，用TaqDNA聚合酶的反应错误掺人相对多些。但在PCR扩增过程中，其错配率一般只有约1／万，足可以供特异性分析。

操作简便、快速
目前国内外已有多种类型的PCR扩增仪，只需把反应材料按一定浓度混合，置于仪器内，反应便按所输入的程序进行。整个PCR操作过程，从标本处理、PCR扩增到产物分析，可在4h内完成全部实验。扩增产物可直接供作序列分析和分子克隆，摆脱繁琐的基因分析方法；可直接从总RNA或DNA中或部分DNA已降解的样品中分离目的基因，省去须先进行克隆后再作序列分析的模式。已固定和包埋的组织或切片亦可用于检测。