ELISA试剂盒测定现一般为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定形式，测定操作十分简略，一般涉及到标本的搜集保留、试剂预备、加样、温育、洗板、显色、比色、成果判别和成果陈述及解释等方面，其间任一过程的不妥都会影响测定成果，且尤以加样、温育和洗板等过程为甚。现分述如下。    
一、标本的搜集和保留    
用于ELISA测定的标本zui为常用的是血清（浆），有时由于特定的检查意图，也用到唾液、脑脊液、尿液、大便等标本。如今上运用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和医治药物等。对用于激素和医治药物测定的血清标本的搜集，要留意搜集时刻甚或体位有也许会对测定成果发生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值呈现：生长激素、促黄体激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以阵发性办法开释，因而，在测定此类激素时，有必要在亲近相连的时刻间隔内采纳数份血样本，以其间间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将呈现明显增高。再如医治药物的检查，应根据药代动力学挑选服药后的zui适时刻抽血检查。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检查的血清标本的搜集则没有时刻和体位方面的影响。 
ELISA试剂盒要思考以下几个方面：    
（1）要留意防止呈现严峻溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有相似过氧化物的活性，因而，在以HRP为符号酶的人ELISA试剂盒测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育过程中吸附于固相，然后与后边参加的HRP底物反响显色。    
（2）样本的收集及血清别离中要留意尽量防止细菌污染，一则细菌的生长，其所排泄的一些酶也许会对抗原抗体等蛋白发生分化效果；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶自身会对用相应酶作符号的测定办法发生非特异性干扰。    
（3）血清标本如是以无菌操作别离，则可以在2～8℃下保留一星期，如为有菌操作，则主张冰冻保留。样本的长时刻保留，应在-70℃以下。    
（4）冰冻保留的血清标本须留意防止因停电等形成的重复冻融。标本的重复冻融所发生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生破坏效果，然后引起假阴性成果。此外，冻融标本的混匀亦应留意，不要进行剧烈振荡，重复倒置混匀即可。     
（5）标本在保留中如呈现细菌污染所造成的的混浊或絮状物时，应离心沉积后取上清检查。  
二、试剂预备     
在试验室，对试剂预备一般不太留意，一般的做法是，在试验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而疏忽了这种做法有也许影响后边温育时刻不行的疑问，其直接的结果是对一些弱阳性标本的检查呈现假阴性。因而在ELISA测定中试剂的预备zui为要害的是，在试验开端前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在运用前与室温平衡。这样做的意图，首要是为了在后边的温育反响过程中，能使反响微孔内的温度能较快地到达所请求的高度，以满意测定请求。其次，如今的产品ELISA试剂盒中的洗板液均需在试验室运用时对所供给的浓缩液稀释制造，因而稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反响显色前暂时制造。    
三、ELISA试剂盒加血清样本及反响试剂    
在如今的人ELISA试剂盒产品试剂盒中，血清样本的参加几乎是仅有的要运用微量加样器参加样本的过程，运用微量加样器加样有必要留意的要害点。?