ELISA试剂盒是以免疫学反应为根底,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化效果相结合起来的一种敏感性很高的实验技能。因为抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每参加一种试剂孵育后,可通过洗刷除去多余的游离反应物,然后确保实验成果的特异性与稳定性。在实践使用中,通过不一样的规划,详细的办法过程可有多种。即:用于检查抗体的间接法(图a)、用于检查抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检查小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。对比常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
ELISA试剂盒提示您操作时应留心:
1、底物A应蒸发,防止经久翻开盖子,底物B对光活络,防止经久露出于光下,防止用手触摸,试验完成后应立即读取OD值。
2、试验中不必的板条应立即放回包装袋中,密封保留,防止蜕变。
3、试剂应按标签说明书储存,运用前恢复到室温,稀释后的规范品应丢掉,不可保留。
4、运用一次性的吸头防止穿插污染,防止运用带金属的加样器。
5、依照说明书中标明的时刻、加液的量及次序进行温育操作。
6、不用的其它试剂应包装好或盖好,不相同批号的试剂不要混用,保质期前运用。
7、洗刷酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反响孔中吸水。
8、运用洁净的塑料容器配备洗刷液,使用前充沛混匀试剂盒里的各种成份及样品。
ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该目标抗体的微孔中依次参加标本或规范品、生物素化的抗该目标抗体、HRP符号的亲和素,通过*洗刷后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的效果下转化成终究的。色彩的深浅和样品中的该目标呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),核算样品浓度。
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