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ELISA的及质量管理酶标仪的校准

时间:2018-4-25阅读:1111
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ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
ELISA的影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
分析前质控
●人员培训实验是人操作的,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:
◎检验项目的基本原理(ELISA原理);
◎临床意义;
◎熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;
◎熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);
◎熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。
◎某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。
分析前质控◎ELISA原理:1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA技术。
特点:在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂" 酶标记免疫活性物质,进行信号放大;
有二步温育反应二次洗涤过程;灵敏度特异性相对较高。局限性:只能检测到水平
精密度差(批内CV15-20%);线性范围窄(一个数量级);存在"HD-HOOK"效应。ELISA原理
●根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法。
●双抗体(原)夹心法检测抗原(体)的常见方法,应用针对抗原两个不同决定族的两种单
抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原)。
●间接法检测抗体的方法,利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。
●竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体,以测抗原为例,使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,结果如待测抗原含量越多,与固相抗体结合的酶标抗原就越少,显色越浅,二者呈负相关。
ELISA原理今后的发展方向
●聚苯乙烯表面的制备。已有的技术是酰肼化(聚二氟乙叉,PVDF);生物素化;预包被多聚赖氨酸等,均是产品。
●酶促信号放大的改变,如酶促荧光、酶促化学发光等。
ELISA临床意义
●各型肝炎的特征及标志物

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