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检测低密度脂蛋白和高密度脂蛋白时候的样本处理资料

时间:2018-7-25阅读:1798
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样本处理:
血清(浆):直接测定,如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。 ②、培养液样本:吸取培养液,1000 转/分,离心 10 分钟,取上清测定。
[注]:一般建议细胞密度在 100万个/ml以上。 ③、组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的匀浆介 质,冰水浴条件下机械匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。
[注]:1、如组织样本为非高脂样本,匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。
检测低密度脂蛋白和高密度脂蛋白时候的样本处理资料!
2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本,匀浆介质可统一用无水乙醇进行提取。 
细胞样本: A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出,1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清液,留细胞沉 淀;用等渗缓冲液(推选0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸盐缓冲液)清洗1~2 次,同样1000 转/分,离心10 分钟,弃上清液,留细胞沉淀;
B、细胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的匀浆介质(推选 0.1mol/L、pH7~7.4磷酸盐缓冲液或生理 盐水)进行匀浆,冰水浴条件下超声破碎(功率:300W,3~5 秒/次,间隔 30 秒,重复 3~5  次)或手动匀浆,制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采用裂解液裂解(推选 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分钟),裂解好的液体不离心直接测定。 
[注]:一般建议细胞密度在 100万个/ml以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎*。

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