免疫测定技能的根底在于抗原抗体之间的特异结合反响，所以任何的诊断试剂离不开的质料，如抗原抗体，酶等。曾经用于免疫测定的抗原一般为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后取得的多克隆抗体和运用杂交瘤技能得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的符号物如酶标结合物则经过各种化学合成办法制备。近年来，跟着分子生物学的发展，运用基因工程办法制备各种特别的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型运用的测定办法也不断出现。
包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。
 酶符号抗体工作浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定（见酶符号抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法"（包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度）在正式试验体系里准确地滴定其工作浓度。
酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而自身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌效果，应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物效果一段时刻后，应参加强酸或强碱以终止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前参加。