血清在细胞培养中为细胞供给氨基酸,蛋白质,维生素(特别是脂溶性维生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,成长因子,矿物质及微量元素。此外,血清还能够缓冲培养基,抑制蛋白水解酶,添加培养基的粘度,降低在移液或拌和时造成的剪切力。
关于动物血清的正确使用,这儿做一个简略的说明。
1、贮存
血清的保质期是5年,贮存温度-10 ~ -30℃。
血清长时间贮存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)或许聚集而构成沉积或可见的混浊。因此,长时间保存血清有必要在-10℃以下贮存,并避免重复冻融。
2、热灭活处理
通常不运用热灭活血清,除非某些特定的细胞系特别需求。热灭活会降低或破坏血清中的成长因子,影响某些细胞的成长。
热灭活zui初是为了灭活补体及支原体。现在,假如血清中呈现支原体,能够经过过滤去除;而去除补体通常是不必要的,除非是在预备或检测病毒或细胞毒性试验时。有研究显示,血清37℃孵育就能够灭活血清中热不稳定的补体成分,只要很少一部分细胞在这种灭活血清中成长得更好,如胚胎干细胞和许多昆虫细胞。
1)按正确操作冻结血清,恢复室温。
2)水浴56℃提前预热。
3)将预备好的血清和装有相同体积水的烧杯一起放入水浴锅,当烧杯中的温度计指示达到56℃时开端计时,灭活30min后结束,整个过程中需求随时摇晃混匀。
3、浑浊和沉积
所有的血清或许保存一些纤维蛋白原。某些外部要素或许引发纤维蛋白原转变为纤维蛋白,导致血清冻结后或许会观察到絮状物或混浊。这些物质的存在不会改动血清的性能。
假如想去除这些絮状沉积物,能够将血清分装到无菌离心管中,以低速离心1~2min,上清液即可直接加入到培养基内运用。
留意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉积物,由于这或许阻塞滤膜。
4、冻结
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但有必要留意的是,融解过程中有必要规则地摇晃均匀。
假如在37℃或更高的温度冻结血清,血清中会呈现沉积。此沉积或许包含磷酸钙结晶,但不改动血清的性能,相同血清热灭活也会导致沉积的构成。
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