设计ELISA复孔查看时，是对同一个样品作两次稀释，再分别加到板上的两个孔，仍是只稀释一次，然后汲取两次分别加到两个孔？前者好像把稀释时的过失也考虑到了，但做出来的效果两个孔相关挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法？

为了减小过失，是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问，我公司技术人员是这样说明的：

1. 前者测的是稀释和移液的过失，后者只需移液过失。

2. 一般都是稀释一次，分两孔吧。同浓度的分复孔。
 
3. 由于是从同一原液稀释，一般不考虑稀释过失(稀释过失是存在的)，都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是逐个稀释，这样可以使稀释过失减小)。

4. 复孔是为了扫除移液体积，板的影响，以及其他系统过失的，要求复孔的浓度是一起的。稀释后分孔能满意此要求，逐个稀释不能。
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ELISA试剂盒操作技巧
    
1.操作前应对试验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18 C～25℃）、反应孵育温度和孵育时间、洗刷的次数等，要先查看水育箱温度，ELISA试剂盒是否符合要求。
    
2.正确使用加样器加样器应笔直参加标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次第要与说明书一起，否则可导致效果过错，试验重复性差。
    
3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗刷次数不要逾越说明书举荐的洗刷次数，洗液在反应孑L内停留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，形成孔问污染，导致假阴性或假阳性。
    
4.要保证加液量一起 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量禁绝，形成显色不一致，判别过错。
    
5.显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，避免显色过强。