根据我公司进口ELISA试剂盒实验技术部多年的经验以及客户们的咨询问题总结，整理分析出了几个需要严格注意的方面，实验者们随上海恒远来看一看吧（供参考）。

 1. 读板时板底不清洁：难免洗板后板底有水渍，这也可能导致读数不准。

 2. 温育温度的选择

说明书表明的温度可有两种（①37℃下1小时、②43℃下45分钟），从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间zui为*。上海恒远生物建议在临床ELISA试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

 3. 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉：曾用洗瓶直接冲洗板。后来虽然也用枪逐孔洗板，但对此注意不够。

 4. 加终止液时应避免产生气泡：终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。

 5. 加样板过多、加样速度慢，造成各孔反应时间不均一：但温度高时，加样时间过长将导致各孔时间的反应时间不均一；还使得孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。如果连续做好几块板，则有可能使某些板不能及时洗板，也导致孵育时间人为延长。