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体内细胞培养及其操作步骤

时间:2010-9-4阅读:1664
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1. 瘤细胞悬液接种

1)无菌选取生长良好(有光泽,淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。   
2)在PBS中将瘤*碎后用匀浆器研磨,经80~100目筛网过滤成细胞悬液。
3)培养细胞应用PBS洗两遍。
4)计数并调整细胞浓度至107~108/ml。
5)常规消毒后,于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位,>106细胞)。初次接种成功率低,细胞数尽可能多一些。
6)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期,以后随着传代潜伏期逐渐缩短,zui后固定为一个相对稳定的时间。
2. 腹水瘤的建立与腹水瘤的接种 将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代,即可成为腹水瘤。初次传代时,腹水常呈血性(含大量红细胞),反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。
1)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤,进行细胞计数。
2)消毒动物,左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞。
3)接种腹水瘤细胞后约7~12d,待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9号针头抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
4)抽取的腹水经3000rpm离心15min,收集上清,分装冻存备用。

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