如何使用酶底物法程控定量封口机

51孔和97定量盘操作说明

51孔和97孔定量盘灭菌消毒

定量盘与DST酶底物法配合使用，定量检测100ml水中微生物，将DST-酶底物法试剂与检测水样混合后加入到51孔或者97孔定量盘中，使用程控定量封口机封膜，根据检测不同项目的培养温度和时间进行培养（24H），数出显阳性的孔格，对照MPN表读结果。

【工作原理】

加入含有总大肠菌群细菌的水样，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃±1℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。

【使用方法】

①定性测试：

步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃±1℃培养24h；

第二步、结果判读

        无色=阴性

        黄色=总大肠菌群阳性

        黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性

注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性

②定量检测

步、在100ml水样中加入试剂，溶解；

第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；

第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封膜，36 ℃±1℃培养24h；

第四步、定量检测盘（定量孔板）结果判读：

        无色=阴性

        黄色格子=总大肠菌群阳性

黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性

查对照MPN表计数

注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。