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抗体检测

时间:2010/12/22阅读:485
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特异性抗体检测的目的首先是协助临床诊断,在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标,预防接种效果的观察,以及传染病流行病学调查中,特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。

原理

在免疫应答中,细胞免疫和体液免疫是两个密切相关、互为调节的生理过程。对这两种免疫反应都有许多检测方法,但迄今为止,在临床检验工作中,以体液免疫反应中的特异性抗体的检测应用zui广泛。

方法

现在抗体检测的方法众多,除传统的沉淀反应,凝集试验,补体结合试验外,标记免疫测定(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)已成为主要的免疫测定技术,免疫印迹法也发挥了明显的作用,一些快速测定法(如快速斑点免疫结合试验)也被广泛使用。

注意问题

不同的检测方法,灵敏度、准确性、重复性并不*相同,加上试剂盒质量不一,都影响到试验结果。在应用或建立一个方法时,检测系统中所有成分的浓度必须经过严格滴定,选择zui恰当的浓度范围。例如酶联免疫吸附试验(ELISA),抗原及酶结合物浓度低,zui后吸光度值太小,易出现假阴性,如浓度太高,吸光度值偏大,甚至移到标准曲线的平台,即处于不敏感的范围便会明显影响结果的可靠性。

为了保证试验的特异性和敏感性,无论是颗粒性抗原、组织提取物、多肽抗原、重组抗原都必须纯化,否则容易产生非特异性反应。在应用标记免疫分析中,可引起本底数值的增高,极大地影响试验的准确性。在检测自身抗体时,许多抗原是用组织提取物,更应注意抗原的纯化问题。由于不同组织、器官间可存在相同抗原成分,使得同一自身免疫病,可检出几种不同自身抗体,同一自身抗体又可出现在不同自身免疫病中,这就影响了检验的特异性。因此提示我们,关于这方面特异性抗原的提取、纯化和合成,还有许多工作要做,是一项任重道远的任务。还必须指出,无论检测哪一种抗体,所用抗原的片段或成分的不同,都可影响其特异性及敏感性。因此采用一种新抗原时,需要进行严格对照,方可确定其应用价值。

抗体有保护性抗体,非保护性抗体之分,有些抗体的水平达到高峰后旋即下降乃至消失,有些抗体可长期存在直至终身。如乙肝核心抗体(抗-HBc),阳性率可高达70%左右,临床医生常因此产生困惑。其实这是抗-HBc的总抗体,可能长期存在。如其滴度低,即为既往感染过乙肝,有流行病学意义,高滴度才有临床诊断意义。再如自身抗体测定中,少数正常人也存在有少量自身抗体,它不仅对机体无害,而且能帮助机体清除衰老及变质的细胞对机体有利。

另外,在临床诊断中,须针对不同发病机理检测相应抗体,如I型超敏反应应检测IgE,而在Ⅱ型超敏反应主要测IgG、IgM型抗体,又如鼻咽癌患者查的是EB病毒壳膜抗原-IgA(IgA/VCA抗体)。另外抗体测定和其他检验一样,存在着假阳性、假阴性的问题,可能由于方法学的不完善引起,或者由于机体反应性的不同所致,在解释结果时务必注意。

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