上海科兴商贸有限公司
免费会员

女人天天干夜夜爽视频 金属硫蛋白提取方法的介绍

时间:2011/4/22阅读:1903
分享:

金属硫蛋白(metallothionein)是由由微生物和植物产生的金属结合蛋白,富含半*的短肽,对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低,半*残基和金属含量*的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌,广泛地存在于从微生物到人类各种生物中,其结构高度保守。

 

对于金属硫蛋白的研究,国内外主要集中在提取、检测以及应用上。由于在实际生产中,主要采用层析法,分离纯化后的金属硫蛋白中还含有其它的杂蛋白,因此本文作者正在进行金属硫蛋白的分子印迹聚合物的研究,使其更好地应用于金属硫蛋白的纯化。

 

金属硫蛋白在生物进化中高度保守,有四种异构体,MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大多数哺乳动物的内脏器官中广泛存在,尤以肝、肾细胞为主,而且参加其功能调节。MT-Ⅲ分布主要限于中枢神经系统,主要分布于星性胶质细胞(集中于细胞体和突起中),其次为神经元细胞,也有报道称少量分布于生殖细胞、小肠、胃、肾和嗅觉皮质细胞中。MT-Ⅳ主要分布于皮肤、舌、消化道等器官的角质细胞和复层鳞状上皮细胞中。

 

以下为金属硫蛋白的提取方法介绍:

1、主要试剂:三羟甲基氨基甲烷(简称Tris);5,5-二硫二(2-硝基苯甲酸)(简称DTNB);PBS缓冲溶液。

2、动物的处理:参考Onsaka等的方法,给家兔皮下注射ZnSO44次,第1天注射60mg/只(约15mg Zn/kg),第2、4天注射90mg/只,第7天注射120mg/只,第8天处死动物取其内脏。

3、粗制品的制备:

1)称重:将前一夜放-4℃冰箱中解冻的试样拿出来用托盘天平称重,试样重量M,到0.1g;

2)搅碎:将试样用剪刀剪成碎片后,用捣碎机捣约30~50s,捣成匀浆;

3)提取:加入相当于试样重量两倍体积的0.02MTris-HCl,用磁力搅拌器搅约半分钟;

4)变性:加入等体积氯仿:乙醇(0.08:1)变性除杂蛋白,搅拌约5分钟;

5)离心:5000rmp、4℃离心25min,弃沉淀,取上清;

6)热变性:75℃热变性3~5min除杂蛋白;

7)过滤:用冰块速冷后用8层纱布过滤,取清液,静置约2h;

8)离心:8000rmp、4℃离心25min,弃沉淀,取上清,得到匀浆液;

9)层析、冻干:对匀浆液进行层析,然后收集富含MT的层析液进行冻干即得MT粗品。

会员登录

×

请输入账号

请输入密码

=

请输验证码

收藏该商铺

X
该信息已收藏!
标签:
保存成功

(空格分隔,最多3个,单个标签最多10个字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~
在线留言