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上海莼试生物技术有限公司
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肺炎链球菌多糖抗原（SPNPS Ag）试剂盒说明书
2017-7-4 阅读(497)
| 提 供 商 | 上海莼试生物技术有限公司 | 资料大小 | 140.1KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 17次 | |
| 资料类型 | JPG 图片 | 浏览次数 | 497次 |
肺炎链球菌多糖抗原（SPNPS Ag）试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定细菌分泌物中肺炎链球菌多糖抗原(SPNPS Ag)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中肺炎链球菌多糖抗原(SPNPS Ag)水平。用纯化的肺炎链球菌多糖抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肺炎链球菌多糖抗原(SPNPS Ag)，再与HRP标记的肺炎链球菌多糖抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肺炎链球菌多糖抗原(SPNPS Ag)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中肺炎链球菌多糖抗原(SPNPS Ag)浓度。
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标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1、肺炎链球菌多糖抗原（SPNPS Ag）试剂盒标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
200ng/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
100ng/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
50ng/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
25ng/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
12.5ng/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、肺炎链球菌多糖抗原（SPNPS Ag）试剂盒测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
