吐露港（ToloBio）生物科技有限公司发现 CRISPR-Cas12蛋白具备高效的“反式切割活性”，并基于该酶的优势研发了“福尔摩斯/HOLMES”核酸快速检测平台技术（one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System）。相比于传统的分子诊断技术，基于CRISPR的HOLMES技术具备高灵敏、高特异、快速便捷等优势，被《Science》杂志誉为“下一代分子诊断技术”，在病原菌检测、遗传疾病筛查、精准医疗等众多领域有很大的应用潜力。
Cas12a
HOLMES检测平台[1]
·Cas12a家族是一类由单个crRNA介导的核酸内切酶
·在HOLMES核酸检测系统中，Cas12a: crRNA: 靶标DNA分子三元复合物的形成会激活Cas12a的反式剪切活性，可无差别的剪切反应体系中的ssDNA分子，包括荧光标记的ssDNA探针，从而产生大量的荧光信号，指示检测结果为阳性
| 产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
| LbCas12a(Cpf1) Nuclease | 100 pmol | 32108-01 | 不仅可用于体外dsDNA的特异剪切，也可用于靶标核酸的快速检测，详见HOLMES核酸快检技术[1] |
| 1000 pmol | 32108-03 |
Cas12b
HOLMESv2检测平台[2]: 实现“一管法”和“绝对定量”
·采用嗜热菌来源的Cas12b，比Cas12a更加耐热，使核酸扩增与靶标检测在同一管中进行
·Cas12b: crRNA: 靶标DNA三元复合物会激活Cas12b的反式剪切活性, 可无差别剪切反应中的ssDNA分子，包括荧光标记的ssDNA探针，从而产生大量的荧光信号，指示检测结果为阳性
·“一管法”体系既能保持对SNP和甲基化位点的分辨能力，又有效地避免气溶胶污染的风险，同时缩短检测耗时
·通过结合HOLMESv2与digital PCR体系，可实现对靶标核酸的绝对定量
| 产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
| AapCas12b(C2c1) Nuclease | 100 pmol | 32118-01 | 最佳反应温度为60℃，可与LAMP恒温扩增联用，实现一步法CRISPR检测体系，详见HOLMESv2核酸快检技术[2] |
| 1000 pmol | 32118-03 |
Cas13a
ToloBio拥有Cas12核酸检测的方法学，并在2020年与美国科学院院士张锋教授创立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13诊断技术达成了中美市场的“交叉授权”合作。2022年11月，双方又进一步签署了全球范围内的CRISPR诊断“交叉授权”合作协议，完成了ToloBio在CRISPR检测领域方法学的全面布局。
HOLMES与SHERLOCK“双剑合璧”[3]
·Cas13家族是一类由crRNA单独介导的核酸内切酶，可特异地识别并剪切靶标ssRNA
·Cas13与crRNA、靶标RNA形成三元复合物后，激活针对非特异序列ssRNA的“反式剪切活性”，将体系中的ssRNA切碎
·靶标RNA浓度越高，体系反式剪切ssRNA报告探针的速度更快，释放荧光信号到达平台期的时间越短
| 产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 | |
| LwaCas13a(C2c2) Nuclease | 100 pmol | 32117-01 | 反式剪切RNA报告探针，可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒 |
|
| 1000 pmol | 32117-03 |
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| 货号 | 产品 | 规格 |
| JY0209 | 双标试纸条条（彩虹型） | 50T |
| JY0307 | Tiosbio® CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条 | 50T |
| JY0301 | Cas12/13专用检测试纸条 | 50T |
| JY0308 | Tiosbio® CRISPR双酶切试纸条条（变色龙） | 50T |
| WLB8201KIT | DNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） | 48T |
| WLE8202KIT | DNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） | 48T |
| WLN8203KIT | DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） | 48T |
| WLRB8204KIT | RNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） | 48T |
| WLRE8205KIT | RNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） | 48T |
| WLRN8206KIT | RNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） | 48T |
| WLB5001 | DNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） | 100T |
| WLN5002 | DNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） | 100T |
| WLR5003 | DNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） | 100T |
| WLRB5001 | RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） | 100T |
| WLRN5002 | RNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） | 100T |
| WLRE5003 | RNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） | 100T |
Cas12f
不同靶ssDNA存在时，Cas12f1行使高效反式剪切活性的荧光信号结果
·Cas12f核酸酶是依赖sgRNA介导的内切核酸酶，倾向于特异结合并剪切靶标ssDNA，且无需PAM位点
·Cas12f蛋白分子量普遍较小（约61.5kD），这是其主要优势之一
·与Cas12a/b功能类似，已有文献报道，Cas12f对ssDNA靶标中SNP位点的分辨能力高于Cas12[4]。
| 产品名称 | 规格 | 货号 | 应用 |
| Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease | 100 pmol | 32119-01 | 与Cas12a/b功能类似，Cas12f也可用于靶标核酸的快速检测 |
| 1000 pmol | 32119-03 |
CRISPR-Dx的优势
·多重：联检/降本；微流控/盘式芯片；色码CARMEN；体系多重
·绝对定量：液相微球/固态微孔
·超灵敏/特异：1-2个拷贝可测；识别PCR灰区、SNP位点、甲基化位点
·超快速：1-5min内完成剪切；恒温扩增；One-Step；免扩增；免提取核酸
·POCT/全自动：LFA；LDT；全流程自动化；便捷/成本低
其他CRISPR-Dx产品
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| AsCas12a(Cpf1) | 32104-01 | 100 pmol |
| 32104-03 | 1000 pmol | |
| AacCas12b(C2c1) | 32116-01 | 100 pmol |
| 32116-03 | 1000 pmol | |
| FnCas12a(Cpf1) | 32106-01 | 100 pmol |
| 32106-03 | 1000 pmol | |
| Lb5Cas12a(Cpf1) | 32110-01 | 100 pmol |
| 32110-03 | 1000 pmol | |
| SpCas9 | 32101-01 | 100 pmol |
| 32101-03 | 1000 pmol | |
| Sp-dCas9 | 32102-01 | 100 pmol |
| 32102-03 | 1000 pmol |
Cas Protein表达质粒
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| pET28TEV-AsCas12a | 92104 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AsCas12a-NLS | 92105 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-FnCas12a | 92106 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-FnCas12a-NLS | 92107 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LbCas12a | 92108 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LbCas12a-NLS | 92109 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Lb5Cas12a | 92110 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-BbCas12a | 92111 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-BoCas12a | 92112 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-HkCas12a | 92113 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-OsCas12a | 92114 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-TsCas12a | 92115 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AacCas12b | 92116 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LwaCas13a | 92117 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AapCas12b | 92118 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1) | 92119 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Lb4Cas12a | 92120 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
CRSIPR体系反式剪切报告探针
| 品名 | 货号 | 规格 |
| HOLMES ssDNA reporter (FAM) | 31101 | 10 nmol powder |
| HOLMES ssRNA reporter (FAM) | 31111 | 10 nmol powder |
Reference:
[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.
[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.
[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.
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