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LPS诱导SD大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞炎症模型建立
2020-12-3 阅读(3416)
目的 建立Sprague Dawley(SD)大鼠的正常膝关节滑膜细胞原代培养方法及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导成纤维样滑膜细胞( fibroblast-like synoviocytes,FLS) 炎症模型。
方法 选取80~120g SPF级幼年SD大鼠, 分离其滑膜组织,原代培养至第3代,用组织化学染色法和EdU法检测FLS蛋白标志物vimentin和增殖功能。 同时,用滑膜组织作对照,检测第3代至第8代原代培养FLS的特征蛋白表达,筛选具有生理功能的高纯度且可用于后续实验的FLS细胞。 LPS诱导FLS炎症后,检测LPS制激FLS不同时间点的 IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达,根据实验结果确定LPS成功诱导FLS炎症模型的时间点。检测FLS被LPS诱导前后的细胞因子、增殖功能和特征蛋白的表达,为分析FLS炎症模型提供实验数据。
结果 采用0.2% I型胶原酶消化法,成功培养了FLS原代细胞。 经检测蛋白标志物vimentin, 第3代FLS纯度达98%以上。 通过FLS特征蛋白检测,筛选出具有生理功能且可用作后续实验的FLS为第3代至第7代原代细胞。 通过对LPS诱导后的FLS的细胞因子和特征蛋白分析,确定1μg/mL LPS诱导FLS细胞3h,能复制出FLS炎症模型。
