Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰*氨酸（PS）高亲和力特异性结合。在正常细胞中，磷脂酰*氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰*氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

Annexin V-iFluor 700标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰*氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰*氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰*氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。

2.Annexin V-iFluor 700标记参数

E x (nm) 690

E m (nm) 713

分子量～36000

溶剂 Water

存储条件在零下15度以下保存，避免光照

3.适用仪器

（1）流式细胞仪

E x:640nm

E m:730/45nm

通道:Alexa Flour-700通道

（2）荧光显微镜

推荐孔板：黑色透明底板

4.数据分析

使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰*氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰*氨酸结合，磷脂酰*氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰*氨酸的结合活性。将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

百萤全面准确的细胞凋亡检测探针----Annexin V-iFluor 700标记

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