在酶组织化学 研究中，仍需遵循标本制作五大基本步骤，即固定或不固定的标本、切片(冷冻或不冷冻)、孵育、显色和显微镜下观察。

    根据组织化学酶检出的基本步骤。主要有以下5方面影响酶活性：

    1．选择zui适温度、pH及缓冲液。

    2．固定和切片标本制作  由于固定液易使酶丧失酶活性，因此用不固定的冰冻切片显示酶活性。切片厚度一般为8～12um，不超过40um，因为切片在60um以上时，浸透速度减慢，易出现人工假象。

    3．捕捉剂和激活剂  捕捉剂是形成zui终产物的基本条件，有Pb²⁺ 、Cu²⁺ 和Ba²⁺ 等，其中Pb²⁺ 广泛应用于磷酸酶、酯酶和转移酶等酶反应。凡能提高酶活性的物质，称为激活剂。

    激活剂分为三大类：

    (1)离子：多为金属离子。一种激活剂对某种酶能起激活作用，但是可能对另一种酶起抑制作用；有时离子间也有拮抗现象，如Na⁺ 抑制K⁺ 的激活作用，Ca²⁺ 抑制Mg²⁺ 的激活作用等。

    (2)小分子化合物：某些还原剂可提高酶活性，例如半*和还原型*等能使酶分子中的双硫键还原成硫氢基。

    (3)激活酶：指可使某些无活性的酶原变为有活性的酶。

    4．抑制剂  指某些物质在不引起酶蛋白变性的情况下，使酶活性减弱，甚至使酶活性消失。

    5．对照实验  为确定被检酶是否具有特异性，以避免发生假阳性或假阴性结果，同时要进行对照实验。酶的性质是指对其相应的底物发生作用。如果有两种或更多酶作用于同一底物时，需要用以下方法进行酶反应特异性的对照实验。

    (1)用酶的抑制剂确认酶活性的对照实验。

    (2)除去底物对照实验：用去底物的孵育液进行反应。确认反应消失或明显减弱。

    (3)阳性对照实验：用已确定有某种酶存在的组织细胞与待测组织同时进行反应，两者相互对照，以确认酶活性的存在。