男女呻吟久久免费视频 酸性α免疫试验

一、原理

T淋巴细胞质内含有酯酶，可以水解α-醋酸萘酯，产生α-萘酚，α-萘酚又可与重氮付品红偶联生成不溶性的偶氮付品红萘酚，在T淋巴细胞浆酯酶存在的部位生成不溶性的黑红色的颗粒沉淀，而b淋巴细胞无此反应。以资鉴别。

二、材料与试剂

1．固定液 40%甲醛
2．分层液（聚蔗糖－） 比重1.077+0.001，配制见细胞分离技术一章。
3．染色液
（1）付品红液：取2g付品红加入2N HCl 100ml, 温水浴溶解后保存于4℃备用。
（2）溶液（现用现配）：取0.14g加入双蒸馏水10 ml，振荡溶解。
（3）α-醋酸萘酯溶液：取2gα-醋酸萘酯溶于乙二醇单甲醚100ml中，贮于棕色瓶内，于4℃保存。
（4）0.067 Mol/L pH7.6PB液
甲液 KH2PO4 9.08溶于1 000ml双蒸馏水
乙液 KH2PO4 9.47g溶于1 000ml双蒸馏水
（6）甲基绿复染液：取1g甲基绿，溶于100ml双馏水中，4℃保存。
（7）应用染色液（孵育液）的配制 取1ml溶液缓慢滴入1ml的付品红液中，边加边摇匀，付品红液由红色变为浅黄色，混合后，静置1min～2min，将此混合液倒入30ml pH7.6PB液中，充分混合后，再加入α-醋酸萘酯溶液0.85ml，边加边搅拌，混匀后使用。

三、操作方法

1．标本的制备 取肝素抗凝血1ml，加等量或适量的生理盐水稀释，取分层液2ml加入离心管内，然后将上述稀释的血液沿管壁缓缓加入至分层液上，注意不要打破两层界面。以水平转子离心机1 000～1 500r/min离心20min。结果形成四层，zui上面*层为血浆层，第二层为淋巴细胞（包括单核细胞）层，第三层为分层液，第四层为红血球。用毛细管吸取血浆层，然后吸取淋巴细胞放入适量的Hank’s液（或生理盐水）中，充分摇匀。2 000r/min离心5min～10min弃上清液，再重复洗涤一次，即获淋巴细胞。以此淋巴细胞粥涂片。自然干燥后，以40%甲醛蒸汽固定10min。
2．染色镜检
（1）于固定的标本片上滴加孵育液，以覆盖为度，37℃染45min～60min，蒸馏水冲洗。
（2）甲基氯复染1min～5min，蒸馏水冲洗。
（3）自然干燥，镜检。

四、结果判定

在胞浆内出现大小不一、数量不等的黑红色颗粒的细胞为T淋巴细胞，无此颗粒的为B淋巴细胞。同时计数淋巴细胞100～200个。求出它们各占的百分比。
几种动物的T淋巴细胞正常值
马 57.8+2.009%
骡 51.8+2.037%
小白鼠 76.42+4.44%
豚鼠 73.43+8.04%
兔 77.0+2.79%
人 62.3+8.62%