1、麻醉后消毒，下腹正中切口于膀胱颈（结扎处远端约1~2cm），严格无菌操作取出标本、位于超净台旁
2、在超净台，40u/ml溶液中浸泡5分钟
3、生理盐水漂洗1次
4、D－hanks液漂洗1次
5、放入D－hanks液中，除去粘膜、粘膜下及浆膜
如果是Shame组兔，以10ml注射器抽取约8ml D－hanks液，于粘膜层下注射起泡后，剪去粘膜层，直接剪取平滑肌组织，弃浆膜层及其上未剪下之肌组织。
new: 如果是不全BOO兔，则可将膀胱剪成宽约0.5cm之条状，撕去粘膜层后，助手以一将该组织一端固定，与该组织垂直，并夹持整个横截面，术者同法夹持于附近，助手持第3把提起肌组织，术者以锐性分离肌层；如此，向另一端推进，锐性分离肌条。
6、在超净台，取相当于0.5为X0.5 CM2肌块，室温下将其剪碎成1~2mm碎组织块
7、转移入离心管
8、加入D－hanks液(操作成功) OR Dulbecco
9、离心1000转/min，10分钟 离心半径13cm?弃上清
10、加入I型胶原酶（2mg/ml） 5mg,(II型胶原酶2mg/ml 5mg也可，但效果不如I型胶原酶)
11、不要加入DMEM为主要成分的培养液(否则失活)
12、转移入培养瓶中
13、4度下过夜孵育。
14、加0.25%,36.5度振荡消化15~30min,弃上清。
15、200目(74um)不锈钢网过滤。(可省)，转移入离心管,***吹打后待可见物沉淀，吸尽沉淀（避免组织块培养法）
16、离心1000转/min，10分钟 离心半径13cm?弃上清
18、加培养液至10ml(ok)
17、转移入培养瓶中
19、CO2恒温箱中培养
20、12h后收集未贴壁细胞并计数
