13127537090
1.概 述
牛牛天天人人综合影院 mRNA差异显示技术（mRNA differetial display）是一种快速有效的克隆差异性表达基因的方法。
方法建立：1992年 Liang P和Pardee应用DD技术对比人类乳腺癌细胞与正常细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所*的基因
目前已应用于个各领域：
农业、植物
动物
医学
? 胚胎发育
? 遗传病
? 药物
? 肿瘤
2.mRNA差异显示原理
是分离差异表达基因的一个重要方法。人类大约含有三万个不同的基因。在不同的单个细胞中只有10％的基因处于表达状态。
生物体在不同的生理，病理状态下，基因的表达水平不同。
生命过程中选择性表达的基因主要有：发育与分化、体内平衡、对攻击的应答、细胞周期调节、老化和程序性细胞死亡等。
差异显示获得的只是某个基因的片段，而不是直接获得全长cDNA克隆。
3.基本程序
选择表型特性差异显著对象
展示mRNA的差异
基因差异
克隆与表型差异高度相关的新基因
4.技术
? 基本技术
逆转录（ RT ）
聚合酶链反应（PCR）
凝胶电泳
5.RT-PCR
? 锚定引物 T12-MN，含有12个T可以结合于mRNA 3`端 poly（A）尾，M为A、C、G 3种碱基之一，N为A、T、C、G 4种碱基之一。
? 荧光锚定引物 ，引物5`端加入T7 RNA多聚酶启动子并带有荧光分子
----------- AAAAAAAAAA –3` mRNA
------------XAAAAAAAAAAA–3` 1/3 mRNA
MTTTTTTTTTTTT（12T） Prime
---------YXAAAAAAAAAAAAA –3` 1/12 mRNA
NMTTTTTTTTTTTT（12T）Anchor Prime
?荧光锚定引物：
NMTTTTTTTTTTTT-T7 RNA多聚酶启动子-荧光分子
（Genomyx company）
因此共有12种锚定引物
?同位素标记锚定引物
?随机引物 （Arbitrary Prime）
可以随机地与cDNA不同位置多个位点结合，扩增出不同长度的cDNA片段混合物。
共20种随机引物，随机引物-M13
?随机和锚定引物的多种组合可以展示10000-15000种mRNA
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，环保在线对此不承担任何保证责任。
温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。
