牛牛天天人人综合影院 抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书

【资料简介】

抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒 产品说明书

主要用途

抗体/蛋白HRP标记制备试剂 是一种旨在通过高碘酸氧化产生活化的辣根过氧化酶，与抗体或蛋白中氨基偶联反应，进一步还原和中和作用，确保复合体的稳定的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种种系的抗体、纯化蛋 白 的HRP标记 。其应用于后续 WESTERN BLOT 、免疫组化、 ELISA 等。 产品即到即用，性能稳 定 ，操作便捷，反应敏感，重复性好。

技术背景

辣根过氧化酶，分子量44Kd，常作为标记，用于免疫反应的定量检测（enzyme immunoassay；EIA），例如免疫印迹WESTERN BLOT、免疫检测ELISA和免疫化学染色immunohistochemical staining等。辣根过氧化酶具有价廉、高纯、高特异活性、稳定等优点，成为主要的（占80％）抗体或蛋白缀和标记酶。基于辣根过氧化酶为糖蛋白，含有8个糖链，通过高碘酸避光氧化，使羟基和醛基分离后，活化的HRP既不失活，又能 在碱性条件下， 与所有蛋白或抗体存在的氨基进行偶联反应，形成席夫碱（ Schiff's bases ），进而在酸性透析处理后去除剩余的高碘酸和预防自偶联。经过温和的 硼氢化氰钠 （ sodium cyanoborohydride ）还原水合作用， 以及乙醇胺（ethanolamine ）或2- 巯基乙胺 （ 2-mercaptoethy lamine）中和残余的醛基，使标记蛋白/抗体更加 稳定 。

产品内容

缓冲液（Reagent A）   1毫升

标记液（Reagent B）       50微升

还原液（Reagent C）      200微升

中和液（Reagent D）  50微升

保存液（Reagent E）   1毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存 在 －20 ℃ 冰箱里；有效保证6月

用户自备

目标抗体或蛋白：用于HRP标记

1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器

震荡器：用于混匀反应物

实验步骤

• 移取10微升（总量100微克）用户自备的目标抗体或蛋白（分子量在160Kd左右或以下）
• 加入90微升 缓冲液（Reagent A） ，混匀
• 加入10微升 标记液（Reagent B） ，混匀
• 室 温下（25 ℃） 孵育1小时或4 ℃ 冰箱里孵育16小时
• 加入10微升 还原液（Reagent C） ，混匀
• 室温下孵育15分钟
• 加入10微升 中和液（Reagent D） ，混匀
• 室温下孵育15分钟
• 加入130微升 保存液（Reagent E） ，混匀
• 获得标记蛋白或抗体终浓度0.6毫克/毫升
• 即刻放进-70 ℃ 保存或置于冰槽里备用
• 或继续后续ELISA、WESTERN BLOT、IMMUNOHISTOLOGY等

注意事项

• 本产品为 5 次 （100微克/次） 操作
• 操作时，须戴手套
• 样品中避免含有*（sodium azide）、Tris、甘氨酸（glycine）、氢氧化铵（NH4OH）等，否则干扰标记
• 如果 标记液（Reagent B） 没有充分溶解，可以放 在4 ℃ 冰箱里 72小时或更长时间后使用
• 如果需要增加标记量，则相应增加试剂用量
• 如果标记500Kd以上的蛋白或抗体，则使用20微升 标记液（Reagent B） 即可
• 标记效率取决于目标蛋白或抗体与活化HRP的分子摩尔浓度比例和结构关系
• HRP标记蛋 白复合体在4 ℃ 温度下保持4周稳定；在－20 ℃ 温度下，保持6个月稳定
• 标记抗体后续应用建议用量如下：

应用	标记抗体浓度
ELISA	250纳克/毫升至2.5微克/毫升
WESTERN BLOT	0.5微克/毫升至50微克/毫升
IMMUNOHISTOLOGY	2.0微克/毫升至5.0微克/毫升

• 本公司提供系列 蛋白/抗体标记 试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶