牛牛天天人人综合影院 革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒产品说明书

【资料简介】

革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒 产品说明书

主要用途

革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂 是一种旨在使用 差 速离心，分离并收集所有细胞 外膜囊泡 的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌 外膜囊泡及其 蛋白的纯化。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取产量和纯度皆佳。

技术背景

外膜囊泡（outer membrane vesicle；OMV）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、DNA、RNA、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双层磷脂，20至200纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境或宿主细胞进行反应，并调解各种功能，包括促进病理形成，调节细菌互动，转运各种信号分子（例如DNA、RNA、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡10倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。 通过 差速离心和 蛋白酶抑制混合剂 ，获得高纯外膜囊泡， 充分保留 其 蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容

保存液 （ Reagent A）        毫升

溶解液（Reagent B）        毫升

活性液（Reagent C）        微升

产品说明书   1份

保存方式

保存 活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里 ， 其余的保存在4℃冰箱里 ， 有效保证 6 月

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器

分光光度仪：用于测定细菌浓度

台式离心机：用于样品操作

超速离心机： 用于样品操作

恒温摇床 ：用于 培养 细菌细胞

0.45微米滤膜：用于样品操作

真空浓缩装置：用于样品操作

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的 活性液（ Reagent C ） 从－20 ℃ 的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出 xx 毫升 溶 解液（ Reagent B ） 到1.5毫升离心管，加入 xx 微升 活性液（ Reagent C ） ，充分混匀，置于冰槽里，标记为 溶 解工作液 。 然后进行下列操作。

• 准备好 1 毫升 过夜培养的 新鲜细菌样品
• 移取500微升到50毫升细菌培养液（注意：用户可以进行诱导培养，例如无铁培养等）
• 放进 37 ℃ 恒温摇床孵育过夜，速度为200RPM
• 在分光光度仪上测 OD 600 为 1 （ 1 OD ＝ 1 X 10 ⁹ 细胞 / 毫升；总量为 5 X 10 ¹⁰ 细胞）
• 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
• 放进 4 ℃台式离心机离心 3 0 分钟，速度为 50 00g
• 小心 移取 上清液 到新的50毫升锥形离心管
• 重复实验步骤6和7一次
• 使用0.45微米滤膜真空过滤一次
• （选择步骤）使用100kD蛋白临界点浓缩处理
• 放进 4 ℃ 超速 离心机离心 3小时 ，速度为 1 5 00 00g
• 小心抽去上清液
• 加入 xx微 升 预冷的 保存液（Reagent A）
• 或加入xx微升 预冷的含有 溶 解液（ Reagent B ） 和 活性液（ Reagent C ） 的 溶 解工作液
• 用枪头上下抽吸，充分混匀
• 转移到 到新的预冷的1.5毫升离心管
• 即刻 放进－70 ℃ 冰箱里保存或置于 冰 冰槽 里备用
• 进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

注意事项

• 本产品为 20 次（ 50 毫升菌液）操作
• 所有操作须 在 4 ℃状态下进行
• 建议使用新鲜细菌 接种 ，培养到指数生长阶段为理想状态
• 活性液 （ Reagent C） 避免反复冻融
• 本产品按照 50 毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量
• 根据菌种不同， 50 毫升（ OD 600 ＝ 1 ）菌液可获得 5 至100微克 外膜囊泡 蛋白
• 制备产物如果放在－ 70 ℃ 冰箱里 储存备用 ，严格避免反复冻融
• 本公司提供系列细菌试剂产品
  

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定无蛋白酶污染