女人天天干夜夜爽视频 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶试剂盒说明书

【资料简介】

α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af） 试剂盒说明书
                                                            分光光度法  50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
α-L-Af  是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类，使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、
阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离，促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随
着阿拉伯糖的丧失，该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af） 试剂盒说明书 测定原理：
α-L-Af分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm有zui大吸收峰，通过
测定吸光值升高速率来计算 α-L-Af活性。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试
剂仍-20℃保存。
试剂二：液体15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104
个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1mL提
取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声 3s，间隔10s，重复30 次）；
15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，
加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af） 试剂盒说明书 测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）  测定管  对照管
试剂一  200
蒸馏水    200
试剂二  250  250
样本    50  50
迅速混匀，放入 37℃准确水浴30min
试剂三  1000  1000
充分混匀，400nm处测定吸光值 A，计算 ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
α-L-Af活性计算：
标准条件下测定的回归方程为 y =0.00585x  -0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL） ，y为吸光
值。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg组织蛋白每 min产生 1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-L-Af活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每小时产生 1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-L-Af活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
α-L-Af活性(nmol/min/104
cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.08×(ΔA +0.0027)
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中
样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；  500：细胞或细
菌总数，500万；T：反应时间，30min。