牛牛天天人人综合影院 F410 大肠杆菌宿主蛋白酶联免疫分析（ELISA）

【资料简介】

F410 大肠杆菌宿主蛋白 酶联免疫 分析（ ELISA ）

试剂 盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。上海丰翔生物高品质ELISA试剂盒供应商，品质，售后完善。欢迎垂询： 提供免费代检测服务。

1使用目的：

本试剂盒用于 饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉）， 药物 、血清和尿样中 F410大肠杆菌宿主蛋白 残留的定量检测 。

2 实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA 方法，在微孔板包被有 F410大肠杆菌宿主蛋白 偶联抗原，加入 F410大肠杆菌宿主蛋白 标准品或样品，游离 F410大肠杆菌宿主蛋白 与微孔条上预包被的 F410大肠杆菌宿主蛋白 偶联抗原互相竞争抗 F410大肠杆菌宿主蛋白 抗体酶标记物，用TMB 底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在 450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中 F410大肠杆菌宿主蛋白 含量成反比 ，通过标准曲线 计算样品 中 F410大肠杆菌宿主蛋白 的含量。

3 试剂盒组成

3. 1预包被的 F410大肠杆菌宿主蛋白 偶联抗原的可拆酶标板：1 块（ 12 孔 ×8 条）。
3. 2 F410大肠杆菌宿主蛋白 标准品：6 瓶（ 1ml/ 瓶），含量分别是： 0 ug/ml , 0.1 ug/ml , 0.3 ug/ml , 0.9 ug/ml , 2.7 ug/ml,8.1 ug/ml

3. 3抗 F410大肠杆菌宿主蛋白 抗体酶结合物：1 瓶（ 6ml ）。
3. 4显色液 A ： 1 瓶（ 6ml ）。
3. 5显色液 B ： 1 瓶（ 6ml ）。
3. 6终止液： 1 瓶（ 6ml ）， 2M 硫酸。
3. 7*： 1 瓶（ 10 × ,  6 ml），用于样品稀释用。
3. 8浓缩洗涤液： 1 瓶（ 2 0×， 20 ml），用于洗板。
3. 9说明书一份。

4 需要而未提供的材料
4.1设备
4.1.1波长 450nm 酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2甲醇。
5贮存
5.1试剂盒贮存于 2~8 ℃ ，切勿冷冻
5.2未用完的微孔板应该密封干燥保存
6注意事项
6.1使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2不要使用过期试剂盒。
6.3试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（ 25±2 ℃ ），建议至少回温2 小时。
6.4标准品中含有 F410大肠杆菌宿主蛋白 ，使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
6.8稀释样本时必须用本试剂盒中的*，否则会影响实验结果
6.9混合试剂时应避免起泡。
7工作液准备
7.1 F410大肠杆菌宿主蛋白 标准品溶液：0 ug/ml , 0.1 ug/ml , 0.3 ug/ml , 0.9 ug/ml , 2.7 ug/ml,8.1 ug/ml

7.2浓缩洗涤液：用蒸馏水按 1: 2 0（1+ 1 9）稀释 备用

7.3*：备用
7.3显色剂：已备用，避免光线直照
7.4反应终止液：已备用
8样品处理程序 （样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
8.1取 10g 粉碎的样品，加 20ml 70% 甲醇溶液
8.2强力振荡 3 分钟
8.3用 Whatman No 1 滤纸过滤
8.4取 10 0µl处理后的样品，加入 400µl *
8.5取 50μl 稀释液进行分析（稀释倍数 10 ）
动物组织 前处理

8.6准确称取 1 ± 0.05  g 匀浆后的组织样品到50  ml 的聚苯乙烯离心管中；加入3 ml 乙腈-- 丙酮 提取溶液，2000rpm 剧烈震荡 20s 后 4000r/min 以上离心 5 min

8.7取上清液 0.8 ml 在50 ℃ 氮气流下吹干

8.8加入 2mL1 × 样品稀释液Ⅰ, 750rpm 涡旋 20s

8.9 取 10 0 m l用于分析

饲料 前处理方法

8.10准确称取 1 ± 0.05  g 粉碎饲料样品到50  ml 的聚苯乙烯离心管中；加入4 ml 乙腈，1 ml丙酮 ，2000rpm 剧烈震荡 20s 后 4000r/min 以上离心 3 min

8.11取上清液 0.7 ml 在50 ℃ 氮气流下吹干

8.12加入 1mL1 × 样品稀释液Ⅰ, 涡旋 20s ，取出 100 m l 加到900 m l  1 × 样品稀释液Ⅰ，混匀后 取 10 0 m l用于分析

牛奶 前处理方法

8.13取 1 ml 牛奶样品到 2  ml 离心管中；用1 × 样品稀释液Ⅱ稀释30 倍，混匀后 取 10 0 m l用于分析

奶粉 前处理方法

8.14准确称取 0.3g 奶粉样品到 7 ml 的聚苯乙烯离心管中；加入 2ml 1× 样品稀释液Ⅲ， 2 ml 正己烷，震荡混匀

8.15 4000r/min 以上离心 5min ，去除有机层和中间层，取下层溶液 100 m l 到 300 m l 1× 样品稀释液Ⅲ

8.16混匀后取 100 m l 用于分析
9酶免分析步骤
9.1实验须知
9.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（ 25±2 ℃ ），时间约2 小时。回温至室温（ 25±2 ℃ ）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8 ℃ 干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。
9.1.2使用后请立即将试剂放回 2~8 ℃ 保存
9.1.3请不要改变分析程序
9.1.4请使用的微量移液器
9.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
9.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2分析步骤
9.2.1预*行编号，标记 B0 、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
9.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回 2~8 ℃ 保存
9.2.3样品稀释液（ 10× ）、浓缩洗涤液（ 2 0×）稀释成工作液 （蒸馏水或去离子水稀释 ）
9.2.4在 B0 孔中加入 50µl0.0 ug/ml 标准品溶液
9.2.5在各标准孔中加入 50μl 的标准品溶液
9.2.6在各样品孔中加入 50µl 样品溶液
9.2.7在所有孔中加入 50µl 的抗 F410大肠杆菌宿主蛋白 抗体酶结合物
9.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37℃ 温浴 3 0min（温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
9.3.1甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板 5 次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
9.4反应
9.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入 50µl 显色液 A ，再加 50µl 显色液 B ；轻微晃动反应板使之*混匀
9.4.2 37℃ 温浴10min
9.4.3每孔中加入 50µl 终止液，混匀
9.4.4在 450nm 下检测吸光度，结果在 5min 内读取。
10结果计算
10.1定量分析
10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（ B ）除以*个标准（ 0 标准）的吸光度值（ B0 ）再乘以 100% ，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0 ug/ml 标准溶液的平均吸光度值
10.1.2以 F410大肠杆菌宿主蛋白 浓度的对数值为X 轴，百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为 F410大肠杆菌宿主蛋白 浓度的对数值，求得反对数即为测定液中 F410大肠杆菌宿主蛋白 浓度C （ ug/ml ）
10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
10.2半定量测定
10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11特异性
物质 交叉反应
F410大肠杆菌宿主蛋白 100 %

12试剂盒参数
本试剂盒检测下限为 0.1 ug/ml
B0吸光度*值应大于 1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8 ％，板间误差小于 15 ％。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80 ％。