男女呻吟久久免费视频 脂蛋白脂酶（LPL）﹠肝脂酶（HL）活性测定试剂盒

【资料简介】

测定意义：

LPL （ lipoprotein lipase ）存在于肝外组织毛细血管内皮细胞表面，催化血浆中乳糜微粒 (CM) 和极低密度脂蛋白 (VLDL) 中甘油三酯 (TG) 的水解，在 CM 及 VLDL 的降解中发挥重要作用。 HL （ hepatic lipase ）仅存在于肝内皮细胞表面，在中密度脂蛋白 (IDL) 和高密度脂蛋白 (HDL) 代谢中起重要作用。 LPL 和 HL 活性降低，可引起高甘油三酯血症。在高脂血症、动脉粥样硬化的发病机理及脂蛋白代谢研究中，常常需要测定 LPL 及 HL 活性。

测定原理：

LPL 和 HL 均能水解乳剂中 TG ，生成游离脂肪酸；进一步通过铜试剂法测定体系中游离脂肪酸的生成。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、微量注射器、可见分光光度计 / 酶标仪、微量石英比色皿 /96 孔板、可调式移液枪、肝素钠、氯坊（三氯钾烷）、无水乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 ×1 瓶， 4 ℃ 保存。

试剂二：液体 ×1 瓶，室温保存。

试剂三：自备。实验前 1 d ，在 10 mL 试剂瓶中加入 4.8 mL 正庚烷， 0.2 mL 无水钾醇， 5 mL 氯坊（自备），盖紧后混匀，室温保存。

试剂四：液体 ×1 瓶，室温保存。

试剂五：粉剂 ×1 瓶， 4 ℃ 保存。临用前向试剂瓶中加入 5 mL 无水乙醇，充分溶解。

标准品：粉剂 ×1 瓶，室温保存。临用前向试剂瓶中加入 7.8 mL 氯坊充分溶解，即为 500μmol/L 的棕榈酸标准溶液。

粗酶液提取：

1 、血液中 LPL 与 HL 活性测定： 按动物体重， 150U/kg 肝素钠溶液静脉注射， 20min 后取血液，即下表中粗酶液，待测。

2 、组织中 LPL 与 HL 活性测定： 组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约 0.1 g 样品，加入 1 mL 生理盐水，冰浴匀浆， 8000rpm ， 4 ℃ 离心 10min ，取上清液，即粗酶液，待测。

LPL 和 HL 测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm ，蒸馏水调零。

2. 空白管： 取带盖 玻璃试管，加入 2 μL 蒸馏水， 100μL 试剂三， 40 μL 试剂四， 40μL 试剂五，盖紧后充分震荡混匀（ 2min ），倒入微量石英比色皿 /96 孔板，静置 15min ，于 550nm 光吸收，记为 A 空白管。

3. 标准管： 取带盖 玻璃试管，加入 2 μL 标准液， 100μL 试剂三， 40 μL 试剂四， 40μL 试剂五，盖紧后充分震荡混匀（ 2min ），倒入微量石英比色皿 /96 孔板，静置 15min ，于 550nm 光吸收，记为 A 标准管。

4. 总脂酶测定管： 取带盖玻璃试管，加入 10 μL 粗酶液， 100μL 蒸馏水， 100μL 试剂二，盖紧后混匀； 37 ℃ 水浴准确保温 60min ；吸取 2μL 上述溶液，加入另一个 0.5mL EP 管，加入 100μL 试剂三， 40 μL 试剂四， 40μL 试剂五，盖紧后充分震荡混匀（ 2min ），倒入微量石英比色皿 /96 孔板，静置 15min ，于 550nm 光吸收，记为 A 总脂酶管。

5. 肝脂酶测定管： 取带盖玻璃试管，加入 10 μL 粗酶液， 100μL 试剂一， 100μL 试剂二，盖紧后混匀； 37 ℃ 水浴准确保温 60min ；吸取 2μL 上述溶液，加入另一个 0.5mL EP 管，加入 100μL 试剂三， 40 μL 试剂四， 40μL 试剂五，盖紧后充分震荡混匀（ 2min ），倒入微量石英比色皿 /96 孔板，静置 15min ，于 550nm 光吸收，记为 A 肝脂酶管。

LPL 和 HL 活性计算：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 血液中 LPL 与 HL 活性计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每毫升血清（浆）每分钟在反应系统中所产生的 1 μ mol FFA 。

总脂酶活性（ U/mL ） =[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷(V 样 ÷V 样总 )÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ） =0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

C 标准液：标准品浓度， 500 μmol/L=0.5 μmol/mL ； V 反总：催化反应体系总体积， 10+100+100=210μL=0.21 mL ； V 样：加入催化反应体系中粗酶液体积， 10μL ； V 样总：粗酶液总体积， 1mL=1000μL ； T ：催化反应时间， 15 min 。

2. 组织中 LPL 与 HL 活性计算

（ 1 ）按蛋白浓度计算

37 ℃ 中每毫克蛋白每分钟内催化产生 1μmol FFA 。

总脂酶活性（ U/mg pr ）

=[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷(Cpr×V 样 )÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷Cpr

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ）

=0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷Cpr

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

（ 2 ） 按样本鲜重计算

37 ℃ 中每克样品每分钟内催化产生 1μmol FFA 。

总脂酶活性（ U/g 鲜重）

=[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷ (V 样 ÷V 样总 ×W) ÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷W

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ） =0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷W

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

C 标准液：标准品浓度， 500 μmol/L=0.5 μmol/mL ； V 反总：催化反应体系总体积， 10+100+100=210μL=0.21 mL ； V 样：加入催化反应体系中粗酶液体积， 50μL=0.05 mL ； V 样总：提取液体积， 1 mL ； Cpr ：粗酶液蛋白质浓度， mg/mL ； T ：催化反应时间， 15 min 。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 血液中 LPL 与 HL 活性计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每毫升血清（浆）每分钟在反应系统中所产生的 1 μmol FFA 。

总脂酶活性（ U/mL ） =[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷(V 样 ÷V 样总 )÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ） =0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

C 标准液：标准品浓度， 500 μmol/L=0.5 μmol/mL ； V 反总：催化反应体系总体积， 10+100+100=210μL=0.21 mL ； V 样：加入催化反应体系中粗酶液体积， 10μL ； V 样总：粗酶液总体积， 1mL=1000μL ； T ：催化反应时间， 15 min 。

2. 组织中 LPL 与 HL 活性计算

（ 1 ）按蛋白浓度计算

37 ℃ 中每毫克蛋白每分钟内催化产生 1μmol FFA 。

总脂酶活性（ U/mg pr ）

=[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷(Cpr×V 样 )÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷Cpr

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ）

=0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷Cpr

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

（ 2 ） 按样本鲜重计算

37 ℃ 中每克样品每分钟内催化产生 1μmol FFA 。

总脂酶活性（ U/g 鲜重）

=[ C 标准液 ÷(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]×V 反总 ÷ (V 样 ÷V 样总 ×W) ÷T

=0.7×(A 总脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷W

肝脂酶（ HL ）活性（ U/mL ） =0.7×(A 肝脂酶管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 ) ÷W

脂蛋白脂酶（ LPL ）活性（ U/mL ） = 总脂酶活性－ HL

C 标准液：标准品浓度， 500 μmol/L=0.5 μmol/mL ； V 反总：催化反应体系总体积， 10+100+100=210μL=0.21 mL ； V 样：加入催化反应体系中粗酶液体积， 50μL=0.05 mL ； V 样总：提取液体积， 1 mL ； Cpr ：粗酶液蛋白质浓度， mg/mL ； T ：催化反应时间， 15 min 。