女人天天干夜夜爽视频 脂肪酶（LPS）活性试剂盒

【资料简介】

测定意义：

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。 LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计 / 酶标仪、微量石英比色皿 /96 孔板、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 ×2 瓶， 4 ℃ 保存。

试剂二：液体 ×1 瓶，室温保存。

试剂三：液体 ×1 瓶， 4 ℃ 保存。

标准品 ×1 瓶， 10 µmol/mL 的标准溶液，室温保存。临用前加入 3.168 mL 无水乙醇，充分溶解。

粗酶液提取：

称取约 0.1g 样品，加试剂一 1 mL 充分研磨， 16000rpm 4 ℃ 离心 40min ，取上清液待测。

LPS 测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 710 nm ，蒸馏水调零。

2. 试剂一和试剂二置于 37 ℃ 水浴预热 30min 以上。

3. 空白管： 取 1.5 mL EP 管，依次加入 150μL 试剂一和 50μL 试剂二，反复震荡混匀；加入 5μL 蒸馏水，迅速震荡混匀后置于 37 ℃ 水浴准确反应 10 min ；加入 400μL 甲苯，反复震荡混匀后，室温 4000rpm 离心 10min ；取出离心管，小心吸取上层溶液 200μL ，加入另一 1.5mL EP 管，再加入 50μL 试剂三，反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10min ，小心吸取上层溶液 150μL ，加入微量石英比色皿 /96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 空白管。

4. 标准管： 取 1.5 mL EP 管，依次加入 150μL 试剂一和 50μL 试剂二，反复震荡混匀；加入 5μL 标准品，迅速震荡混匀后置于 37 ℃ 水浴准确反应 10min ；加入 400μL 甲苯，反复震荡混匀后，室温 4000rpm 离心 10min ；取出离心管，小心吸取上层溶液 200μL ，加入另一 1.5mL EP 管，再加入 50μL 试剂三，反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10min ，小心吸取上层溶液 150μL ，加入微量石英比色皿 /96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 标准管。

5. 测定管： 取 1.5mL EP 管，依次加入 150μL 试剂一和 50μL 试剂二，反复震荡混匀；加入 5μL 上清液，迅速震荡混匀后置于 37 ℃ 水浴准确反应 10min ；加入 400μL 甲苯，反复震荡混匀后，室温 4000rpm 离心 10min ；取出离心管，小心吸取上层溶液 200μL ，加入另一 1.5mL EP 管，再加入 50 μL 试剂三，反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10 min ，小心吸取上层溶液 150 μL ，加入微量石英比色皿 /96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 测定管。

LPS 活性计算：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（ 1 ）按蛋白浓度计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸。

LPS (U/mg prot) =[V 反总 ×C 标准品 ×V 标准品 ×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]÷ （ Cpr×V 样 ÷V 样总 ) ÷T=0.1×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )÷Cpr

（ 2 ） 按样本鲜重计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每克样品每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸。

LPS (U/g 鲜重 ) =[ V 反总 ×C 标准品 ×V 标准品 ×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]÷ (V 样 ÷V 样总 ×W) ÷T=0.1×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )÷W

C 标准品： 10 µmol/mL ； V 标准品：加入反应体系中标准品体积， 0.005 mL ； V 反总：反应体系总体积， 205μL=2.05×10^-4L ； V 样总：上清液总体积， 1 mL ； V 样：加入反应体系中上清液体积， 0.005 mL ； Cpr ：上清液蛋白质浓度， mg/mL ，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒； W ： 样品质量； T ：催化反应时间， 10 min 。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

（ 1 ）按蛋白浓度计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸。

LPS (U/mg prot) =[V 反总 ×C 标准品 ×V 标准品 ×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]÷ （ Cpr×V 样 ÷V 样总 ) ÷T=0.1×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )÷Cpr

（ 2 ） 按样本鲜重计算

活性单位定义： 37 ℃ 中每克样品每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸。

LPS (U/g 鲜重 ) =[ V 反总 ×C 标准品 ×V 标准品 ×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )]÷ (V 样 ÷V 样总 ×W) ÷T=0.1×(A 测定管－ A 空白管 )÷(A 标准管－ A 空白管 )÷W

C 标准品： 10 µmol/mL ； V 标准品：加入反应体系中标准品体积， 0.005 mL ； V 反总：反应体系总体积， 205μL=2.05×10^-4L ； V 样总：上清液总体积， 1 mL ； V 样：加入反应体系中上清液体积， 0.005 mL ； Cpr ：上清液蛋白质浓度， mg/mL ，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒； W ： 样品质量； T ：催化反应时间， 10 min 。

注意事项：

1 、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2 、实验过程中须远离火源。