男女呻吟久久免费视频 致泻性大肠埃希氏菌五重 PCR 试剂盒

【资料简介】

产品名称： 男女呻吟久久免费视频 致泻性大肠埃希氏菌五重 PCR 试剂盒 产品规格： 50T/盒

产品货号： KLP08-A0231

产品简介：

大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻症状为主的病原菌，常见的致泻大肠埃希氏 菌主要包括肠道集聚 性 大 肠 埃 希 氏 菌 （ e n t e r o a gg r e g a t i v e E s c h e r i c h i a c o l i , E A E C ） 、 肠 道 致 病 性 大 肠 埃 希 氏 菌 （ e n t e r o p a t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i ， E P E C ） 、产志贺毒素大肠埃希氏菌 ( s h i g a t o x i n - p r o d u c i n g E s c h e r i c h i a c o l i , ST E C ) ( 包括肠道出血性大肠埃希氏菌（ e n t e r o h e m o r r h a g i c E s c h e r i c h i a c o l i ， E H E C ） ) 、产 肠毒素大肠埃希氏菌 （ e n t e r o t o x i g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i ， E T E C ） 、肠道侵袭性大肠 埃希氏菌 （ e n t e r o i n va s i v e E s c h e r i c h i a c o l i , E I E C ） 。该菌广泛存在于自然界，当 其污染食品或水源后，可引起细菌性食物中毒或水源性腹泻病爆发流行，所以致泻大肠 埃希氏菌的检测对社会卫生健康具有极大的意义。

为了满足致泻大肠埃希氏菌检测及研究的需要，本公司根据标准 G B 4 7 89 . 6 合成 了致泻大肠埃希氏菌特征性基因特异性引物，并优化形成本试剂盒。应用本试剂盒进行 检测具有快速、灵敏、特异、准确、操作简单等特点及优点。

包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	致泻大肠埃希氏菌五重 PCR 反应液	1 mL×1 管
试剂二	阳性对照	200 µL×1 管
试剂三	阴性对照	200 µL×1 管
使用说明书		1  份

运输及保存 ：低温运输，-20℃保存。 操作步骤：

一、样本制备（参考 G B 478 9 . 6 ）

固态或半固态样品： 固体或半固态样品 , 以无菌操作称取检样 25 g，加入装有 225 m L 营养肉汤的均质杯中，用旋转刀片式均质器以 8000 r / m i n ~10000 r / m i n 均质 1 m i n ~2 m i n ，或加入装有 225 m L 营养肉汤的均质袋中，用拍击式均质器均质 1 m i n ~2

m i n 。

液态样品： 以无菌操作量取检样 25 mL，加入装有 225  mL  营养肉汤的无菌锥形瓶 ( 瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠 )， 振荡混匀。

二、增菌

将 1 制备的样品匀液于 36℃±1℃ 培养 6 h，取 10 μL , 接种于 30 mL 肠道菌增菌肉汤管内，于 42℃±1℃培养 18 h 。

三、分离

将增菌液划线接种 MAC  和 EMB  琼脂平板，于 36  ℃± 1 ℃ 培养 18 h~24 h , 观察 菌落特征。在 MAC    琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为砖红色至桃红色，不分解乳糖的 菌落为无色或淡粉色；在 EMB 琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为中心紫黑色带或不 带金属光泽，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色，应挑取乳糖发酵，以及乳糖不发酵和 迟缓发酵的菌落。

四、PCR  模板制备

• DNA  提取 : 使用 1 μL 接种环刮取营养琼脂平板或斜面上培养 18 h~24 h  的菌落悬 浮在 20 0 μ L 0 . 85 % 灭菌生理盐水中，充分打散制成菌悬液，于 13000 r / m i n 离心 3 m i n ，弃掉上清液。加入 1 m L 灭菌去离子水充分混匀菌体，于 10 0 ℃水浴或者金属浴维持 1 0 m i n ；冰浴冷却后 1300 0 r / m i n 离心 3 m i n ，收集上清液；按 1 ∶ 20  的比例用灭菌去离子水稀释上清液，取 5 μL 作为 PCR  检测的模板；可用细菌 基因组提取试剂盒提取细菌 DNA，操作方法按照细菌基因组提取试剂盒说明书进行。
• DNA  保存 : 所有处理后的 DNA  模板直接用于 PCR  反应或暂存于 4  ℃  并当天进行PCR   反应；否则，应在 -20 ℃  以下保存备用 1 周。也可用细菌基因组提取试剂盒 提取细菌 DNA ，操作方法按照细菌基因组提取试剂盒说明书进行。

五、试剂准备

• 扩增试剂准备（在反应混合液配制区进行） ：从试剂盒中取出 PCR  反应液，解冻 混匀，瞬离后向每个 PCR  管中各分装 20 μL PCR  反应液，转移至样本处理区。
• 加样（在样本处理区进行） ：在 PCR  反应管内加入 5 μL 制备的核酸样本阳性对 照或阴性对照，盖上盖子，轻弹混匀并瞬时离心后，立即转移至检测区进行反应。总反应体系如下表。

试剂	添加量（25 μL）
致泻大肠埃希氏菌五重 PCR 反应液	20  μL
DNA 样品/阳性对照/阴性对照	5  μL

六、PCR 检测（在检测区进行） 请按照下表设置反应程序：

阶段	温度设计			循环数
预变性	98℃	30	sec	1  ×
PCR 反 应	98℃	15	sec	30  ×
	55℃	30	sec
	68℃	10	sec
反应结束后，将产物进行 1 . 8 % 琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后分析其条带情况。

【结果判定方法】 结果判定

1) 阴性对照：无目的基因条带

2) 阳性对照：有目的基因 Stx1（244 bp） 和 sth（171 bp） 的明显条带。

致泻大肠埃希氏菌类别	阳性基因名称	片段长度（bp）
肠道聚集性大肠埃希氏菌（EAEC）	astA	102
肠道致病性大肠埃希氏菌（EPEC）	escV	544
产志贺毒素大肠埃希氏菌/肠道出血性大肠埃希 氏菌 （STEC / EHEC）	Stx1, escV+ Stx1	244 / 544+244
产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）	sth	647
肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）	i p a H	171

注意事项

1. 开始检测前请仔细阅读本说明书，按要求操作。

2. 组织样品的样本处理和核酸扩增应注意生物安全

3. 试剂使用前，应充分融化均匀后，瞬时离心； PCR  反应管避免反复冻融。

4. 加样时应使样品落入反应液中，不应有样品黏附于管壁上，加样后应尽快压紧管盖。

5. 经样品前处理液处理过的样本，不能用于样本保存，仅用于即时检测

6. 研磨组织样本不宜过大，以防杂质含量高而抑制后续的 PCR  反应。

7. 样品前处理液可置于 4 ℃保存。

8. 本产品只能用于科研实验，不能用于临床诊断。