男女呻吟久久免费视频 游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒说明书

【资料简介】

游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒（测血清、动物组织、微生物、细胞）

微量法 100 管/ 96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异的样本做预测定

测定意义：

游离脂肪酸，也称为非酯化脂肪酸，在与白蛋白结合的血浆中循环。 动物血液中的游离脂肪

酸 (FFA ) 含量是一项重要的生理生化指标。 血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、

内分泌功能有关，游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、功能亢进等疾病而

上升。

测定原理：

用有机溶剂萃取 FFA 。含有 FFA 的有机液与三乙醇胺铜反应 , 在有机相中形成脂肪酸铜 ( 铜

皂 ) FFA 一 Cu 。 Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与 Cu 离子

浓度的关系符合朗伯一比尔定律，因此可利用此反应进行比色。

自备的仪器和用品：

酶标仪、离心机、可调式移液器、 96 孔板、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

萃取液：液体 120 mL×1 瓶， 4 ℃保存；

试剂一：液体 15 mL×1 瓶， 4 ℃保存；

试剂二：液体 15 mL×1 瓶， 4 ℃保存；

试剂三：粉剂 ×1 瓶，室温保存；

试剂四：液体 12 mL×1 瓶， 4 ℃保存；

样本前处理：

1. 动物组织：按照动物组织质量（ g ）：萃取液 mL) 为 1 ： 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组

织，加入 1mL 萃取液），进行冰浴匀浆。震荡提取 15min ， 5000 rpm 4℃ 离心 5min ，取有

机相待测。

2. 血清：吸取 50 μ L 血清样本，加入 1 mL 萃取液，震荡提取 15 min 后， 4 ℃， 5000 rpm 离

心 5 min ，取有机相待测。

3. 微生物、细胞：按照细胞数量（ 10 4 个）：萃取液体积（ mL ）为 500~1000 ： 1 的比例（建

议 500 万细胞加入 1 mL 萃取液）加入萃取液，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 2

秒，间隔 3 秒，总时间 3min ）；震荡提取 15 min ，然后 5000 rpm 4℃ 离心 5min ，取有机相

待测。

注意：有机相待测液可能存在于上层，也可能存在于下层，注意观察，体积较多的那一层

即为有机相待测液。

测定步骤：

1 、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550 nm 。

2 、 工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一（ V ）：试剂二（ V ）：试剂三（ m ） =1 （ mL ）：

1 （ mL ）： 0.66 （ g ）的比例充分混匀。 （注意：现用现配，用多少配多少，在空瓶中配

制，试剂盒中带有 4 个空瓶，先将试剂一与试剂二混合，后再加入试剂三粉剂）

3、 测定管：吸取 600 μ L 样本，加入 200 μ L 工作液，盖紧后震荡 20 min ， 4 ℃， 5000 rpm 离

心 5 min ，分层后取 200 μ L 上层有机相，加入 100 μ L 试剂四，摇匀， 10 min 后测定 550 nm 的

吸光值，记为 A 测定。

4 、空白管：吸取 600 μ L 萃取液，加入 200 μ L 工作液，盖紧后震荡 20 min ， 4 ℃， 5000 rpm 离 心 5 min ，分层后取 200 μ L 上层有机相，加入 100 μ L 试剂四，摇匀， 10 min 后测定 550 nm 的

吸光值，记为 A 空白。

空白管只需测一次。△ A=A 测定 -A 空白

注意： 1 、有机溶剂易挥发，加入 96 孔板后应尽快检测。

2 、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。

FFA 含量计算：

标准曲线： y = 0.0161x - 0.0141 R 2 = 0.9985 x ：棕榈酸标准品浓度（ nmol/mL ）

y ：吸光值差值△ A

1 、血清 FFA 含量计算：

FFA 含量 ( μ mol/mL)=( △ A+0.0141) ÷0.0161 ×V1÷(V3 × V1÷V2) ÷1000

=1.242× ( △ A+0.0141)

2 、动物组织、微生物、细胞中 FFA 含量计算：

（ 1 ）按样本蛋白浓度计算

FFA 含量 ( μ mol/g 鲜重 )=( △ A+0.0141) ÷0.0161×V1÷ （ W×V1÷V2 ） ÷1000

=0.062× ( △ A+0.0141) ÷W

（ 2 ）按样本蛋白浓度计算

FFA 含量 ( μ mo/mg prot)= ( △ A+0.0141) ÷0.0161×V1÷ (V1×Cpr) ÷1000

=0.062× ( △ A+0.0141) ÷ Cpr

V1 ：加入样本体积， 0.6mL ； V2 ：萃取液体积， 1mL ； V3 ：加入血清（浆）体积， 0.05 mL ；

Cpr ：样本蛋白质浓度， mg/mL ； W ：动物组织样品质量， g ； 1000 ： 1 μ mol=1000 nmol 。

注意事项：

1. 蛋白含量不可直接用萃取液提取的有机相待测液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理

盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。

2. zui低 检出限为 20 nmol/mL