男女呻吟久久免费视频 核转录因子κB定量试剂盒说明书

【资料简介】

核转录因子 κ B 定量试剂盒说明书

实验原理 :

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素 / 血清胺 (ST) 水平。用纯化的血清素 / 血清胺 (ST) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清素 / 血清胺 (ST) ，再与 HRP 标记的血清素 / 血清胺 (ST) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻di洗涤后加底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清素 / 血清胺 (ST) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中血清素 / 血清胺 (ST) 浓度。

保存条件及有效期 :

1 ．试剂盒保存：； 2-8 ℃。

2 ．有效期： 6 个月。

试剂盒特点 :

1 、高效、灵敏、特异的抗体 ;

2 、稳定的重复性和可靠性 ;

3 、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体 ;

4 、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型 ;

5 、节省实验经费。

试剂盒组成 :

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶

2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 标准品（ 160pg/ml ） 0.5ml × 1 瓶

3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶

4 样品稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个

标本要求 :

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

样本处理及要求：

1. 血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4 ℃过夜后于 1000g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 -20 ℃或 -80 ℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8 ° C 1000g 离心 20 分钟，或将标本放于 -20 ℃或 -80 ℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4) 冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS （一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS ，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于 5000 × g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本： 1000g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 -20 ℃或 -80 ℃保存，但应避免反复冻融。

试剂盒性能：

1. 灵敏度： zui 小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 10% 。

操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50 μ l ，待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色 10 分钟 .

10. 终止：每孔加终止液 50 μ l ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算：

以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项：

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（× n × 5 ）。

5 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。