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大鼠促黄体激素,大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理和操作步骤

2012年06月08日 09:57:40人气:982来源:上海天齐生物科技有限公司

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【资料简介】

大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 大鼠促黄体激素 (LH) 水平。用纯化的 大鼠促黄体激素(LH) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 促黄体激素(LH) 再与HRP 标记的 促黄体激素(LH) 抗体结合,形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ,经过*洗涤后 底物TMB 显色。 TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 促黄体激素(LH) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线 计算样品 中大鼠促黄体激素(LH) 浓度。

大鼠促黄体激素elisa试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40n g /L

5号标准品

150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液

20n g /L

4号标准品

150 μ l 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

10n g /L

3号标准品

150 μ l 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

5n g /L

2号标准品

150 μ l 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

2.5n g /L

1号标准品

150 μ l 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品 10 μ l(样品zui终稀释度为 5 倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟

4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 μ l,空白孔除外

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50 μ l,再加入显色剂 B50 μ l,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止 50μl ,终止反应 (此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零, 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度(OD 值) 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

上海天齐生物科技有限公司作者

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