大鼠促黄体激素,大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理和操作步骤

【资料简介】

大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠促黄体激素 （LH） 水平。用纯化的 大鼠促黄体激素（LH） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 促黄体激素（LH） ， 再与HRP 标记的 促黄体激素（LH） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 促黄体激素（LH） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中大鼠促黄体激素（LH） 浓度。

大鼠促黄体激素elisa试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40n g /L	5号标准品	150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液
20n g /L	4号标准品	150 μ l的 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
10n g /L	3号标准品	150 μ l的 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
5n g /L	2号标准品	150 μ l的 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
2.5n g /L	1号标准品	150 μ l的 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l， 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品zui终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。

4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

7. 温育：操作同3 。

8. 洗涤：操作同5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂 B50 μ l，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止 液50μl ，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD 值） 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。