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大鼠促黄体激素,大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理和操作步骤
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关 键 词 | 大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理,大鼠促黄体激素elisa试剂盒操作步骤,大鼠促黄体激素eli |
- 【资料简介】
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大鼠促黄体激素elisa试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠促黄体激素 (LH) 水平。用纯化的 大鼠促黄体激素(LH) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 促黄体激素(LH) , 再与HRP 标记的 促黄体激素(LH) 抗体结合,形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ,经过*洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 促黄体激素(LH) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线 计算样品 中大鼠促黄体激素(LH) 浓度。
大鼠促黄体激素elisa试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40n g /L
5号标准品
150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液
20n g /L
4号标准品
150 μ l的 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
10n g /L
3号标准品
150 μ l的 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
5n g /L
2号标准品
150 μ l的 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
2.5n g /L
1号标准品
150 μ l的 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l, 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品 10 μ l(样品zui终稀释度为 5 倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀 。
3. 温育:用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。
4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 μ l,空白孔除外 。
7. 温育:操作同3 。
8. 洗涤:操作同5 。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50 μ l,再加入显色剂 B50 μ l,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止 液50μl ,终止反应 (此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零, 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度(OD 值) 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
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