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牛牛天天人人综合影院 鱼维生素 E(VE)elisa试剂盒说明书
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- 【资料简介】
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鱼 维生素 E(VE) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T15nmol/L -400nmol/L使用目的:本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中维生素 E(VE) 含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼维生素 E(VE) 水平。用纯化的鱼维生素 E(VE) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入维生素 E(VE) ,再与 HRP 标记的维生素 E(VE) 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素 E(VE) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中鱼维生素 E(VE) 浓度。试剂盒组成130 倍浓缩洗涤液20ml × 1 瓶7终止液6ml × 1 瓶2酶标试剂6ml × 1 瓶8标准品( 800nmol/L )0.5ml × 1 瓶3酶标包被板12 孔 × 8 条9标准品稀释液1.5ml × 1 瓶4样品稀释液6ml × 1 瓶10说明书1 份5显色剂 A 液6ml × 1 瓶11封板膜2 张6显色剂 B 液6ml × 1/ 瓶12密封袋1 个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20 ℃保存,但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl ,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl ,然后再加待测样品 10µl (样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置 37 ℃温育 3 0 分钟。4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl ,空白孔除外。7. 温育:操作同 3 。8. 洗涤:操作同 5 。9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl ,再加入显色剂 B50µl ,轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液 50µl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。测定应在加终止400nmol/L5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液200nmol/L4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液100nmol/L3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液50nmol/L2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液25nmol/L1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液液后 15 分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。5 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存:; 2-8 ℃。2 .有效期: 6 个月
标本收集方法:
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。鱼 维生素 E(VE)elisa试剂盒 48次 1200元,96次 2200元
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