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大鼠基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒实验原理

2024年06月04日 18:34:51人气:113来源:上海莼试生物技术有限公司

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【资料简介】

大鼠基质金属蛋白酶10 MMP-10 ELISA 试剂盒说明书

样本处理及要求:

1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到

100 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃ 的温度。加入一定量的 PBS PH7.4 ),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃ 保存,但应避免反复冻融 .

7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。

大鼠基质金属蛋白酶10 MMP-10 ELISA 试剂盒 操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在 di 一、第二孔中分别加标准品 100μl ,然后在 di 一、第二孔中加标准品稀释液 50μl ,混匀;然后从 di 一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl ,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl ,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ,混匀;混匀后从第五、第六孔中各分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl ,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl ,浓度分别为 180 ng/L 120 ng/L 60 ng/L 30 ng/ 15 ng/L )。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ,然后再加待测样品 10μl (样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃ 温育 30 分钟。

4. 配液:将 30 48T 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 48T 20 倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3

8. 洗涤:操作同 5

9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl ,再加入显色剂 B50μl ,轻轻震荡混匀, 37℃ 避光显色 15 分钟 .

10. 终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟。

大鼠基质金属蛋白酶10 MMP-10 ELISA 试剂盒 注意事项

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5. 底物请避光保存。

6. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

7. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8. 本试剂不同批号组分不得混用。

9.如需代测或者样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间避免反复冻融, -20℃ 以下可保存三个月 ,-70℃ 以下可保存六个月。

10. 大鼠基质金属蛋白酶10 MMP-10 ELISA 试剂盒 试剂使用须知:

11. 1 )请参照相关法规、文献、 MSDS 等信息,理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。

12. 2 )通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话,更加注意其他保管和管理。

13. 3 )万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物,不要或者旧的试剂,应按照相关法律法规正当处理。

14. 4 )购买后,请务必确认标签上的注意事项;做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制;在使用前再次确认标签上的注意事项,做好必要的安全对策;对没有标明其危害特性、有害特性的,也要慎重地进行操作;必须带好防护用具,小心翼翼进行操作。

上海莼试生物技术有限公司作者

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