大鼠基质金属蛋白酶10（MMP-10）ELISA试剂盒实验原理

【资料简介】

大鼠基质金属蛋白酶10（ MMP-10 ） ELISA 试剂盒说明书

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到

100万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃ 保存，但应避免反复冻融 .

7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

大鼠基质金属蛋白酶10（ MMP-10 ） ELISA 试剂盒 操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在 di 一、第二孔中分别加标准品 100μl ，然后在 di 一、第二孔中加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后从 di 一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl ，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl ，浓度分别为 180 ng/L ， 120 ng/L ， 60 ng/L ， 30 ng/ ， 15 ng/L ）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃ 温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 （ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （ 48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37℃ 避光显色 15 分钟 .

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟。

大鼠基质金属蛋白酶10（ MMP-10 ） ELISA 试剂盒 注意事项

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物请避光保存。

6. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8. 本试剂不同批号组分不得混用。

9.如需代测或者样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间避免反复冻融， -20℃ 以下可保存三个月 ,-70℃ 以下可保存六个月。

10. 大鼠基质金属蛋白酶10（ MMP-10 ） ELISA 试剂盒 试剂使用须知：

11.（ 1 ）请参照相关法规、文献、 MSDS 等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。

12.（ 2 ）通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。

13.（ 3 ）万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物，不要或者旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

14.（ 4 ）购买后，请务必确认标签上的注意事项；做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制；在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的安全对策；对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作；必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。