牛牛天天人人综合影院 大鼠缺血修饰白蛋白（IMA）Elisa试剂盒说明书

【资料简介】

大鼠缺血修饰白蛋白（IMA） Elisa试剂盒 使用目的：

本试剂盒用于测定 大鼠血清、血浆及相关液体样本中缺血修饰白蛋白（IMA ）含量 。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠 缺血修饰白蛋白（IMA ） 水平。用纯化的 大鼠 缺血修饰白蛋白（IMA ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 缺血修饰白蛋白（IMA ） ， 再与HRP 标记的 缺血修饰白蛋白（IMA ） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 缺血修饰白蛋白（IMA ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中大鼠 缺血修饰白蛋白（IMA ） 浓度。

试剂盒 组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml ×1 瓶	7	终止液	6ml× 1 瓶
2	酶标试剂	6ml× 1 瓶	8	标准 品（1200 U/L ）	0.5ml× 1 瓶
3	酶 标包被 板	12孔× 8 条	9	标准品 稀释液	1.5ml× 1 瓶
4	样品 稀释液	6ml× 1 瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A 液	6ml× 1 瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B 液	6ml ×1/ 瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

600U/L	5号标准品	150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液
300U/L	4号标准品	150 μ l的 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
150U/L	3号标准品	150 μ l的 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
75U/L	2号标准品	150 μ l的 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
37.5U/L	1号标准品	150 μ l的 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l， 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品zui终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

7. 温育：操作同3 。

8. 洗涤：操作同5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂 B50 μ l，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止 液50μl ，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD 值） 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。