牛牛天天人人综合影院 豚鼠基质金属蛋白酶9ELISA 检测试剂盒操作步骤

【资料简介】

牛牛天天人人综合影院 豚鼠基质金属蛋白酶9ELISA 检测试剂盒操作步骤

操作注意事项

1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A 、 B 液时，避免使用带金属部分的加样器。

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7． 底物A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。

8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、 血清----- 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后， 1000 × g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 × g 离心 30 分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000 × g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆----- 将组织加入适量生理盐水捣碎。 1000 × g 离心 10 分钟，取上清液

5、 保存------ 如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备 豚鼠基质金属蛋白酶9ELISA 检测试剂盒

1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

400 ng/ml	（6 号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul 。
200 ng/ml	（5 号标准品）	100ul的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液
100 ng/ml	（4 号标准品）	100ul的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
50 ng/ml	（3 号标准品）	100ul的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
25 ng/ml	（2 号标准品）	100ul的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
12.5 ng/ml	（1 号标准品）	100ul的 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液
0 ng/ml	（空白对照）	原始浓度不用稀释直接加入50ul 。

2． 洗涤缓冲液（50 ×）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。

操作步骤

1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1 ： 1 稀释后加入 50ul 于反应孔内。

3． 加入稀释好后的标准品50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 1 小时。

4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5． 每孔加入80ul 的亲和链酶素 -HRP ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 30 分钟。

6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7． 每孔加入底物A 、 B 各 50ul ，轻轻振荡混匀， 37 ℃温育 10 分钟。避免光照。

8． 取出酶标板，迅速加入50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9． 在450nm 波长处测定各孔的 OD 值。异补骨脂素 Angelicin 20mg/支 HPLC≥98% 523-50-2
肉桂酸 桂皮酸；桂酸；皮酸 trans-Cinnamic acid 20mg/支 HPLC≥98% 140-10-3
肉桂醇 桂皮醇；苯丙烯醇；桂醇 Cinnamyl alcohol 20mg/支 HPLC≥98% 104-54-1
肉桂醛 Cinnamaldehyde 20mg/支 HPLC≥98% 104-55-2
果糖 Fructose 20mg/支 HPLC≥98% 7660-25-5
芒果苷 芒果甙 Mangiferin 20mg/支 HPLC≥98% 4773-96-0
新芒果苷 新芒果甙 Neomangiferin 20mg/支 HPLC≥98% 64809-67-2
DL-薄荷醇 DL-Menthol 20mg/支 HPLC≥98% 89-78-1
豚鼠基质金属蛋白酶9ELISA 检测试剂盒 酪醇 对羟基苯乙醇; 4-羟基苯乙醇 Tyrosol 20mg/支 HPLC≥98% 501-94-0
（R型）人参皂苷Rh1 20（R）Ginsenoside Rh1 20mg/支 HPLC≥98% 89-78-1

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