女人天天干夜夜爽视频 人多效生长因子（PTN）ELISA试剂盒说明书

【资料简介】

上海劲马实验设备有限公司专业供应各种属 elisa试剂盒 ，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量100%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换。若需要了解试剂盒的详细信息，请：：     业务:   何

人多效生长因子（PTN） ELISA试剂 盒

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围 ：  96T

0pg/ml-160pg/ml

使用目的 ：

本试剂盒用于测定 人 血清、血浆及相关液体样本中 多效生长因子（PTN） 含量 。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 人多效生长因子（PTN） 水平。用纯化的 人多效生长因子（PTN） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 多效生长因子（PTN） ， 再与HRP 标记的 多效生长因子（PTN） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 多效生长因子（PTN） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 人多效生长因子（PTN） 浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml ×1 瓶	7	终止液	6ml× 1 瓶
2	酶标试剂	6ml× 1 瓶	8	标准 品（160pg/ml ）	0.5ml× 1 瓶
3	酶 标包被 板	12孔× 8 条	9	标准品 稀释液	1.5ml× 1 瓶
4	样品 稀释液	6ml× 1 瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A 液	6ml× 1 瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B 液	6ml ×1/ 瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

3.血清：

室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4.血浆：

应根据标本的要求选择EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.尿液：

用无菌管收集。离心20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

6.细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。

7.培养细胞

     检测细胞内的成份时，用PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

8.组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），或组织蛋白萃取试剂 , 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器： 5ul 、 10ul 、 50ul 、 100ul 、 200 、 500ul 、 1000ul 。

3． 振荡器及磁力搅拌器等

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.

80pg/ml	5号标准品	150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液
4opg/ml	4号标准品	150 μ l的 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
20pg/ml	3号标准品	150 μ l的 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
10pg/ml	2号标准品	150 μ l的 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
5pg/ml	1号标准品	150 μ l的 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

3. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l， 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品zui终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

4. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。

5. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

7. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

8. 温育：操作同3 。

9. 洗涤：操作同5 。

10. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂 B50 μ l，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

11. 终止：每孔加终止 液50μl ，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

12. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD 值） 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

操作程序总结 ：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请zui后 乘以 总稀释倍数（ ×n×5 ）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

性能

1.灵敏度：zui小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 。

2.特异性：不与 人 其它细胞因子反应。

3.重复性：板内、板间变异系数均小于 10% 。

4. 局限性：6 号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期： 6 个月