大鼠血浆α颗粒膜蛋白（GMP-140）定量检测试剂盒（ELISA）

【资料简介】

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ）定量 检测试剂盒（ ELISA ）

使用说明书

【试剂盒名称】

大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ）定量 检测试剂盒（ ELISA ）

【试剂盒用途】

定量检测大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ）的含量。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ ELISA ）。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ）抗体透明酶标包被板中， 温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物 A 、 B ，底物（ TMB ）在辣根过氧化物酶（ HRP ）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ） 浓度呈正相关， 450nm 波长下测定 OD 值，根据标准品和样品的 OD 值，计算样本中大鼠血浆 α 颗粒膜蛋白（ GMP-140 ）含量。

【试剂盒组成】

1	酶标包被板	12 孔 ×8 条	7	显色剂 B 液	6mL
2	标准品	0.3mL*6 管	8	终止液	6mL
3	20 倍浓缩洗涤液	25mL	9	说明书	1 份
4	*	1mL	10	封板膜	2 张
5	酶标试剂	10mL	11	密封袋	1 个
6	显色剂 A 液	6mL

备注： 标准品（ S0→S5 ）浓度依次为： 16 、 8 、 4 、 2 、 1 、 0 ng/m L .

【需要而未提供的试剂和器材】

1 、 37 ℃ 恒温箱

2、 标准规格酶标仪

3、 精密移液器及一次性吸头

4、 蒸馏水

5、 一次性试管

6、 吸水纸

【操作步骤】

1 、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡 30 分钟。

2 、配液：用蒸馏水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3 、设置加样孔：取足够数量的 酶标包被板，固定于框架上， 分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置。

4 、加标准品：标准品孔中加入标准品 50μL ；空白对照孔不加。

5 、加待测样本：待测样本孔中先加入* 10μL ，再加待测样本 50μL ；空白对照孔不加。

6 、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液 100μL ；空白对照孔不加。

7 、温育： 37 ℃水浴锅或恒温箱温育6 0min 。

8 、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9 、显色：每孔先加入显色剂 A 液 50μL ，再加入显色剂 B 液 50μL ， 37 ℃避光显色15min。

10 、终止： 取出酶标板，每孔加终止液 50μL ，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11 、测定： 以空白孔调零，在终止后 15 分钟内，用 450nm 波长测量各孔的吸光值（ OD 值）。

12 、计算： 根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样本要求】

1 、样本 不能含叠氮钠（NaN₃） ，因为 叠氮钠（NaN₃）是 辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融。

3 、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1 、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2 、 酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3 、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4 、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

5 、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头； 酶标 工作液、*和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔 ；不得重复使用 封板膜 。

6 、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

7 、底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【操作程序总结】

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品、标准品和酶标试剂，37℃反应60分钟

洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

加入终止液

15 分钟之内读OD值

计算

【检测范围】

0.5ng/mL - 16ng/mL

【规格】

96T/ 盒

【贮藏】

2-8 ℃，避光防潮保存。

【有效期】

6 个月