男女呻吟久久免费视频 荧光素标记辣椒素受体抗体IgG相关知识

【资料简介】

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荧光抗体稀释法
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价，若二者效价相差较大，则可将荧光抗体稀释至一临界浓度，使特异性染色呈阳性，而使非特异性染色保持阴性，稀释方法和染色效价测定方法相同。

纯化抗原法
用各种方法提纯单一成分的抗原是产生单价特异性抗体的zui主要条件。近代免疫化学技术（免疫吸收法）和柱层析法等提供了很大的可能性，可参考有关专著。

DEAE 纤维素柱层析法
标记过多或过少荧光素的抗体分子可用 DEAE- 纤维素柱层析法除去。方法如下： DEAE- 纤维素柱的装柱，洗脱、再生方法等与提纯 IgG 方法相同。装柱所需 DEAE- 纤维素量以干重每克交换 20 ～ 50mg 标记蛋白量为宜

葡聚糖凝胶 G-50 柱层析法
除游离荧光素可用 2×46cm 柱层析法，详细方法参阅第二章。加入荧光抗体 15 ～ 18ml （按床体积的 5% ～ 10% 加样），使其缓慢渗入柱内，待即将全部入柱时，加入 PBS 少许，关闭下口，停留 30 ～ 40min ，使游离荧光充分进入细筛孔中，然后再接通洗脱瓶开始滴入洗脱液。加入洗脱液一定量后，荧光抗体即向下移行，逐渐与存留于上端的游离荧光素之间拉开明显的界线，随着大量洗脱液的不断加入，二者分离距离越来越大，荧光抗体zui先流出，分前、中、后三部分收集，测 F/P 比值，合格者合并，浓缩，分装。洗脱液用 20% 磺基水杨酸测定蛋白（发生沉淀反应），继续洗脱，游离荧光素则相继被洗脱下来，至洗脱液中无蛋白和荧光素后，此层析柱即可再用。
若用以除去荧光抗体中的游离荧光素和硫酸铵等盐类，可先在过柱前透析一夜，否则， NH4+ 太浓，在蛋白未*洗脱时即出现 NH4+ ，因而影响提纯与回收蛋白，一般待洗脱液出现蛋白时，即进行收集，之后出现 SO4++ （用 1%BaCl2 检查发生白色沉淀）。zui后是 NH4+ ，（用纳氏 试剂检查呈黄棕色沉淀），待洗脱液无 SO4++ 及 NH4+ 后可再用。
如仅用小量荧光抗体，可用 1×20cm 的柱层析柱，取 2g Sephadex G-50 装柱，即可过滤 2 ～ 3.5ml 荧光抗体。