荧光素标记血管粘附蛋白1抗体IgG，Anti-VAP1/FITC

【资料简介】

荧光素标记血管粘附蛋白1抗体IgG，Anti-VAP1/FITC

Anti-VAP1/FITC  荧光素标记血管粘附蛋白1抗体IgG

anti-VASH1/FITC  荧光素标记兔抗血管抑制蛋白1抗体IgG

Anti-VAT/FITC  荧光素标记囊泡乙酰*通道抗体IgG

Anti-USP1/FITC  荧光素标记泛素特异性蛋白酶1抗体IgG

Anti-VCAM-1/FITC（CD106）  荧光素标记血管内皮细胞粘附分子抗体IgG

Anti-VCAM-1/CD106 /FITC  荧光素标记血管内皮细胞粘附分子抗体IgG

Anti-Vcan/FITC  荧光素标记蛋白聚糖Versican抗体IgG

Anti-V.cholera Ogawa/FITC  荧光素标记01群稻叶型霍乱弧菌抗体IgG

ANti-V5 tag/FITC  荧光素标记V5 tag标签抗体IgG

Anti-V5 tag/HRP  辣根过氧化物酶标记V5 tag标签抗体IgG

Anti-V.cholera Ogawa/FITC  荧光素标记01群小川型霍乱弧菌抗体IgG

Anti-VCP/p97 /FITC  荧光素标记抗含缬酪肽蛋白抗体IgG

Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群稻叶型霍乱弧菌抗体IgG

Anti-V.cholera Ogawa/Biotin  *化01群小川型霍乱弧菌抗体IgG

Anti-Influenza A Virus H1/HRP  辣根过氧化物酶标记羊抗季节性A型流感病毒H1抗体IgG

Anti-Influenza A Virus H3/HRP  辣根过氧化物酶标记羊抗季节性流感病毒H3抗体IgG

蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆 0.5-1min 。然后 4 ℃ ， 13,000g 离心 15min 。取上清液作为样品。（二）电泳：制备电泳凝胶，进行 SDS-PAGE 。

转移：（半干式转移）
1 、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡， 5min×3 次。
2 、膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和 NC 膜，浸入转膜缓冲液中 10min 。
3 、转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、 24 层滤纸、 NC 膜、凝胶、 24 层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、 NC 膜对齐，每一步去除气泡，上压 500g 重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源 , 恒流 1mA/cm2 ，转移 1.5hr 。转移结束后，断开电源将膜取出 , 割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中 50s 后，在 50% 甲醇中多次脱色，至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。

免疫反应：
1 、用 0.01M PBS 洗膜， 5min ×3 次。
2 、加入包被液，平稳摇动，室温 2hr 。
3 、弃包被液，用 0.01M PBS 洗膜， 5min×3 次。
4 、加入一抗（按合适稀释比例用 0.01M PBS 稀释，液体必须覆盖膜的全部）， 4 ℃ 放置 12hr 以上。阴性对照，以 1%BSA 取代一抗，其余步骤与实验组相同。
5 、弃一抗和 1%BSA ，用 0.01M PBS 分别洗膜， 5min×4 次。
6 、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗（按合适稀释比例用 0.01M PBS 稀释），平稳摇动，室温 2hr 。
7 、弃二抗，用 0.01M PBS 洗膜， 5min×4 次。
8 、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。
四、注意事项
1 、一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定*条件。
2 、显色液必须新鲜配置使用，zui后加入 H2O2 。
3 、 DAB 有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细