牛牛天天人人综合影院 荧光素标记肿瘤抑素抗体IgG相关知识

【资料简介】

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1 、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏 B 淋巴细胞的 过程。 一般选用 6-8 周龄雌性 Balb/c 小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应 B 淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B 淋巴细胞。

  2 、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

  3 、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用 HAT 选择性培养基。在 HAT 培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤 - * - 磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成 DNA 而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤 - * - 磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤*磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在 HAT 培养基中存活和增殖。

  4 、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在 HAT 培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

  5 、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

（ 1 ）体内诱生法 取 Balb/c 小鼠，首先腹腔注射 0.5ml 液体石腊或降植烷进行预处理。 1-2 周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约 1-2 周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

（ 2 ）体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。