男女呻吟久久免费视频 猪游离血红蛋白（F-Hb）酶联免疫分析

【资料简介】

猪 游离血红蛋白（F-Hb） 酶联免疫 分析

试剂 盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：  96T

0.3 μ g /ml  - 24 μ g /ml

使用目的：

本试剂盒用于测定 猪 血清、血浆及相关液体样本中 游离血红蛋白（F-Hb） 含量 。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 猪 游离血红蛋白（F-Hb） 水平。用纯化的 猪 游离血红蛋白（F-Hb） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 游离血红蛋白（F-Hb） ， 再与HRP 标记的 游离血红蛋白（F-Hb） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 游离血红蛋白（F-Hb） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 猪 游离血红蛋白（F-Hb） 浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml ×1 瓶	7	终止液	6ml× 1 瓶
2	酶标试剂	6ml× 1 瓶	8	标准 品（ 48 μ g /ml）	0.5ml× 1 瓶
3	酶 标包被 板	12孔× 8 条	9	标准品 稀释液	1.5ml× 1 瓶
4	样品 稀释液	6ml× 1 瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A 液	6ml× 1 瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B 液	6ml ×1/ 瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

24 μ g /ml	5号标准品	150 μ l的原倍标准品加入 150 μ l标准品稀释液
12 μ g /ml	4号标准品	150 μ l的 5 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
6 μ g /ml	3号标准品	150 μ l的 4 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
3 μ g /ml	2号标准品	150 μ l的 3 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液
1.5 μ g /ml	1号标准品	150 μ l的 2 号标准品加入 150 μ l标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50 μ l， 待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l，然后再加待测样品 10 μ l（样品zui终稀释度为 5 倍）。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。

3. 温育：用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 μ l，空白孔除外 。

7. 温育：操作同3 。

8. 洗涤：操作同5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50 μ l，再加入显色剂 B50 μ l，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止 液50μl ，终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零， 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度（OD 值） 。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请zui后 乘以 总稀释倍数（ ×n×5 ）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1． 试剂盒保存： ；2-8 ℃ 。

2．有效期： 6 个月