男女呻吟久久免费视频 小鼠莱姆病酶联免疫分析试剂盒使用方法

【资料简介】

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中莱姆病（ Lyme-D ）表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠莱姆病（ Lyme-D ）表达。用纯化的小鼠莱姆病（ Lyme-D ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中莱姆病（ Lyme-D ）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的莱姆病（ Lyme-D ）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中小鼠莱姆病（ Lyme-D ）的存在与否。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶

2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 阳性对照 0.5ml × 1 瓶

3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 阴性对照 0.5ml × 1 瓶

4 样品稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50 μl 。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40 μl ，然后再加待测样品 10 μl 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl ，再加入显色剂 B50 μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50 μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥1.00; 阴性对照平均值 ≤0.10

临界值（ CUT OFF ）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值 +0.15

阴性判定：样品 OD 值 < 临界值（ CUT OFF ）者为莱姆病（ Lyme-D ）阴性

阳性判定：样品 OD 值 ≥ 临界值（ CUT OFF ）者为莱姆病（ Lyme-D ）阳性。

注意事项

1 ．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5 ．底物请避光保存。

6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存： 2-8 ℃。

2 ．有效期： 6 个月