牛牛天天人人综合影院 小鼠重组干扰素a-2b酶联免疫分析

【资料简介】

检测范围： 96T

10 ng/L -240ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）水平。用纯化的小鼠重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ），再与 HRP 标记的重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠重组干扰素 a-2b （ rIFN-a-2b ）浓度。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶

2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 标准品（ 480ng/L ） 0.5ml × 1 瓶

3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶

4 样品稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

120 ng/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

60 ng/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

30 ng/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

15 ng/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl （样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存：； 2-8 ℃。

2 ．有效期： 6 个月