女人天天干夜夜爽视频 小鼠白介素23（IL-23）ELISA试剂盒白介素23说明书

【资料简介】

小鼠 IL-23 ELISA 试剂 盒使用说明书

厦门慧嘉生物科技有限公司

本试剂盒仅供研究使用

预期应用

ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中 IL-23 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定 标本 中 IL-23 水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 IL-23 抗原、 *化的抗小鼠IL-23 抗体、 HRP 标记的 亲和素 ，经过*洗涤后用底物TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 IL-23 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成 及试剂配制

1. 酶联板：一块 （96 孔）

2. 标准 品 （冻干品） ： 2 瓶， 每瓶临用前以样品 稀释液稀释 至1ml ，盖好后静置 10 分钟以上，然后反复颠倒 / 搓动以助溶解，其浓度为 10000 pg/mL ，做系列倍比稀释后，分别稀释成 10000 pg/mL ， 5000 pg/mL ， 2500 pg/mL ， 1250 pg/mL ， 62 5  pg/mL， 312.5 pg/mL ， 156 pg/mL ，其原液直接作为zui高标准浓度，样品 稀释液 直接作为标准浓度0 pg/mL ，临用前 15 分钟内配制。

如配制5000 pg/mL 标准品：取 0.5ml 10000 pg/mL 的上述标准品加入含有 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3. 样品 稀释液 ：1 × 20 ml / 瓶 。

4. 检测 稀释液 A ： 1 ×10 ml / 瓶 。

5. 检测 稀释液 B ： 1 ×10 ml / 瓶 。

6. 检测溶液A ：1 × 120u l/ 瓶（1 ： 100 ）临用前以 检测稀释液A 1： 100 稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔 100ul ），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 1ul 检测溶液 A 加 99ul 检测 稀释液 A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7. 检测溶液B ：1 × 120u l/ 瓶（1 ： 100 ）临用前以 检测稀释液B 1： 100 稀释。稀释方法同检测溶液 A 。

8. 底物 溶液： 1 ×10 ml / 瓶。

9. 浓 洗涤液 ： 1 ×30 ml / 瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。

10. 终止液 ： 1 ×10 ml / 瓶（ 2 N H 2 SO4）。

标本 的采集及保存

1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于 -20 ℃， 且应 避免反复冻融 。

2．血清：标本请于室温放置 2 小时或 4 ℃过夜后于 1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测， 或将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融。

3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心15 分钟，或 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融。

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤

各试剂在使用前平衡至室温。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、 待测样品孔 。除空白孔外，余孔分别加 标准溶液 或待测样品100 ul ，注意不要有气泡， 轻轻混匀， 酶标板加上盖， 37 ℃ 反应120 分钟 。

2. 弃去液体， 甩干 ，不用洗涤。

3. 每孔加 检测溶液A 工作液 100ul ， 37 ℃,60分钟。 洗板3 次， 350ul/ 每孔， 甩干。

4. 每孔加 检测溶液B 工作液 100ul， 37 ℃ ， 6 0分钟，洗板 5 次，甩干。

5. 依序每孔加 底物溶液 90 ul ， 37 ℃避光 显色 30 分钟 （此时肉眼可见标准品的前3-4 孔有明显的梯度兰色，后 3-4 孔梯度不明显）。

6. 依序每孔加 终止 溶液 50ul，终止反应 （此时兰色立转黄色） 。用酶联仪在4 50 nm波长依序测量各孔的光密度（ OD 值） 。

注 ：

1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加 底物 溶液及 2 NH 2 SO4。测量时先用此孔调 OD 值至零。

2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层 吸 水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟 ， 根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

特异性

 本试剂盒可同时检测重组或天然的小鼠IL-23 ，且与其它相关蛋白无交叉反应。

计算

以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释倍数 ；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释倍数 ，即为样品的实际浓度。

注意事项

1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

2． 一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

3． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

4． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后 乘以 稀释倍数。

5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

6．底物请避光保存。

检测范围：1.56 pg/ml-100 pg/ml

灵敏度：0.39 pg/ml

（发表有三篇外文文献）

说明

1． 试剂盒保存： -20 ℃ （较长时间不用时）；2-8 ℃ （频繁使用时）。

2．有效期： 6 个月

3 ．浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

4．刚开启的 酶联板 孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

5．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。