人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

【资料简介】

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) 水平。用纯化的

人 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次

加入 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) ，再与 HRP 标记的 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) 抗体结合，

形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催

化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 B 细胞淋巴

瘤因子 2(Bcl-2) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线

计算样品中人 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2) 浓度。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶

2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 标准品（ 160μg/L ） 0.5ml × 1 瓶

3 酶标包被板 12 孔× 8 条 9 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶

4 样品稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

80μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

40μg/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

20μg/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

10μg/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

5μg/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ，

然后再加待测样品 10μl （样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育3 0 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止，液后 15 分钟以内进行。