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女人天天干夜夜爽视频 豚鼠干扰素γ(IFN-γ)ELISA试剂盒说明书下载
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关 键 词 | 豚鼠干扰素γ说明书,IFN-γ ELISA KIT,IFN-γ试剂盒,干扰素γ,IFN-γ |
- 【资料简介】
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豚鼠 干扰素γ(IFN-γ) 酶联免疫 分析(ELISA) 试剂 盒
实验 目的:本试剂盒 仅供研究使用, 用于测定豚鼠血清,血浆及相关液体样本中干扰素γ(IFN-γ) 的含量。
实验原理 :
应用双抗体夹心法测定 标本 中 豚鼠 干扰素γ(IFN-γ) 水平。用纯化的 豚鼠 干扰素γ(IFN-γ) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 干扰素γ(IFN-γ),再与HRP标记的 IFN-γ 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ,经过*洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 干扰素γ(IFN-γ) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度(OD值), 通过标准曲线 计算样品 中豚鼠 干扰素γ(IFN-γ) 浓度。
样本处理及要求 :
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 ℃保存,但 应 避免反复冻融 .
7. 不能检测含NaN3的样品 ,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100 μ l,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50 μ l,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100 μ l分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 μ l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50 μ l弃掉,再各取50 μ l分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50 μ l分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 μ l,混匀后从第七、第八孔中分别取50 μ l加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50 μ l,混匀后从第九第十孔中各取50 μ l弃掉。(稀释后各孔加样量都为50 μ l,浓度分别为48 ng/L ,32 ng/L ,16 ng/L ,8 ng/L ,4 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品10 μ l(样品zui终稀释度为5倍)。 加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀 。
3. 温育:用封板膜封板后置37 ℃温育3 0 分钟 。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 μ l,空白孔除外 。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50 μ l,再加入显色剂B50 μ l,轻轻震荡混匀,37 ℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止 液50μl,终止反应 (此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零, 4 50 nm波长依序测量各孔的 吸光 度(OD值) 。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
检测范围:
2 ng/L -50 ng/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存: 2-8 ℃
2.有效期:6个月
应用:仅供科学实验研究使用,具体产品信息请来电或在线方式咨询。
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