牛牛天天人人综合影院 蛋白质染色中常用染色液分析

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牛牛天天人人综合影院 蛋白质染色中常用染色液分析

染色液种类繁多，各种染色液染色原理不同，灵敏度各异。使用时可根据需要加以选择。常用的染色液有：

1．氨基黑10B(amino black 10B又称为amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack，2B 200)氨基黑10B分子式为C22H13N6S3Na3，MW=715，λmax=620-630nm，是酸性染料。其磺酸基与蛋白质反应构成复合盐，是zui常用的蛋白质染料之一，但对SDS-蛋白质染色效果不好。另外，氨基黑10B染不同蛋白质时，着色度不等、色调不一(有蓝、黑、棕等)；作同一凝胶柱的扫描时，误差较大。

2．考马斯亮蓝R250(coomassie brilliant blue R250，简称CBBR250或PAGE blue83)

考马斯亮蓝R250的分子式为C14H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560-590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。该染料是通过范德瓦尔键与蛋白质结合，尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色，但蛋白质浓度超过一定范围时，对高浓度蛋白质染色不合乎Beer定律，作定量分析时要注意这点。

3．考马斯亮蓝G250(简称CBBＧ250或PAGE blue G90，又名xylene brilliant cyanin G)

考马斯亮蓝G250比CBB R250多二个甲基。MW=854，λmax=590-610nm。染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。其优点是在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地使蛋白质染色而几乎无本底色，所以常用于重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。

4．银染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的，它较CBB R250灵敏100倍。但染色机制

尚不清楚，可能与摄影过程Ag+的还原相似。其灵敏度很高，牛血清为4×10-5μg/mm2，即清蛋白为8×10-5μg/mm2，cyt C为1.7×10-4μg/mm2，因此也常用于凝胶电泳蛋白质染色。

上海劲马生物表示经醋酸纤维、琼脂(糖)、聚丙烯酰胺电泳分离的各种生物分子需用染色法使其在支持物相应位置上显示出谱带，从而检测其纯度、含量及生物活性。蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸及酶等均有不同的染色方法